Содержание

Как разводить протеин с водой и молоком? Пропорции, правила приема

Протеин — это белковая пищевая добавка. Прием протеина обусловлен необходимостью набора дневной нормы белка. Это особенно касается бодибилдеров и людей, которые стремятся к построению рельефного и мощного мышечного корсета. Купив порошок в спортивном магазине, люди задаются вопросом: "А как разводить протеин?".

Как выбрать основу для разведения протеина?

Протеин обычно разводиться молоком или водой. Иногда протеин замешивают на соке, компоте, кефире, чае, лимонаде и т. д. Молоко является идеальным вариантом. Оно богато кальцием, белком и полезными углеводами. Но если есть непереносимость лактозы, то от молока придется отказаться в пользу воды или другой основы. Даже если с лактозой у вас все в порядке, учитывайте следующее:

  • молоко добавит калорийности;
  • на молоко организм реагирует резким скачком инсулина.

При всем при этом молоко улучшает вкус коктейля. Если вы соблюдаете диету, то учитывайте калорийность молока и инсулиновый ответ организма.

Вам необходимо держать инсулин на низком уровне. Однако протеиновый коктейль с утра — это хорошая идея даже для худеющих, так как чувствительность к инсулину с утра высокая, и углеводная толерантность тоже высока. Если вы хотите набрать мышечную массу, то коктейль на молоке — отличное решение.

Как принимать протеин?

На упаковке продукта производитель обязательно пишет инструкцию по применению. На всех банках с протеином можно найти информацию о количестве микронутриентов и других питательных веществ, содержащихся в одной мерной ложке. Прежде чем начинать принимать, стоит ознакомиться с инструкцией к продукту. Некоторые протеины низкоуглеводные, в других достаточно много углеводов. В некоторых протеиновых порошках больше белка, чем в других.

Только ознакомившись с составом и учитывая свои дневные нормы, можно высчитать необходимое количество протеина. Однако, вне зависимости от этого, существуют общие рекомендации. Например, в дни тренировок протеин рекомендуется принимать дважды. Первый раз — за один час до начала тренировки. Это позволит защитить мышцы от распада и подкормит их во время тренировки. Второй раз — сразу после тренировки в течение получаса. В это время организму для восстановления сил нужны питательные вещества и особенно белок.

Вообще, получить дневную норму белка из протеина очень легко. Но профессионалы не рекомендуют этого делать. Лучше всего получать белок по схеме 50/50, т. е. 50 % из натуральной белковой пищи, и 50 % из протеинового порошка.

Схема приема протеина

Построение спортивного тела невозможно без белков. Все белковые смеси делятся на быстрые, медленные и комплексные.

Быстрые протеиновые смеси пьют утром и после тренировки для восполнения запасов аминокислот. Медленный протеин принимают на ночь, чтобы обеспечить клетки и ткани необходимым запасом питательных веществ. Если вы стремитесь сбросить вес, то можете заменить медленным протеином один прием пищи. Комплексные смеси можно употреблять как после тренировки, так и перед сном.

Количество белка в сутки

После тренировки "на массу" рекомендуется принять 20-40 грамм белка в течение получаса. Количество белка зависит от мышечной массы. Есть рекомендация: не принимать более 30 грамм белка за один прием пищи. Этот показатель индивидуальный. Все зависит от здоровья организма, в частности, почек, и от способности организма переварить определенное количество белка. Знайте, что съедая, например, 200 грамм куриной грудки, вы потребляете за раз 46 грамм белка.

Как рассчитать свою норму белка в сутки?

Рекомендуется в сутки потреблять 2-3 грамма белка на 1 кг веса. Для женщин эта норма немного меньше, чем для мужчин. Так, если вы женщина весом 60 кг, то дневная норма белка для вас составляет 120 грамм. Из них 60 грамм вы можете получать из протеинового порошка. Если вы мужчина, весом 60 кг, то вы вполне можете потреблять 180 грамм белка в сутки. Из них 90 грамм должны приходиться на натуральную пищу (куриная грудка, сыр, творог, молоко, яйца и прочие высокобелковые продукты).

Как разводить протеин?

Обычно одна мерная ложка протеинового порошка составляет 30 грамм. Стандартов по пропорциям не существует. Все зависит от вкусовых предпочтений. Чем больше порошка и меньше основы, тем слаще будет коктейль. Многое зависит и от самой основы. Например, коктейли на молоке слаще, чем на воде.

Итак, как разводить протеин с молоком? пропорции и количество указаны ниже.

На молоке протеиновая смесь получается достаточно сладкой, поэтому рекомендуется одну мерную ложку, т. е. около 30 грамм, разводить в 500 мл молока. Если вы собираетесь выпить две мерные ложки, то вам потребуется литр молока. Если говорить о том, как правильно разводить протеин с молоком, то можно рекомендовать либо использовать большой объем жидкости (1 литр), либо смешать молоко с водой, чтобы не было приторно сладко.

Для приготовления коктейля нужно брать молоко невысокой жирности.

Второй по популярности основой для разведения протеинового порошка является вода.

Как разводить протеин с водой? Точно так же, как и с молоком, только нужно учитывать вкусовые особенности. Разводить протеин с водой, как рекомендуют это профессиональные атлеты и производители протеиновых смесей, лучше всего в ручном шейкере. Шейкеры можно купить в тех же спортивных магазинах, что и протеин.

Как разводить протеин с водой? Пропорции и количество очень важны. На воде протеин получается менее сладким. На одну мерную ложку будет достаточно 200-250 мл воды. А для двух мерных ложек хватит и 500 мл. Для этого используется негазированная минеральная, очищенная либо кипяченая вода.

Как разводить протеин в шейкере?

Почему многие рекомендуют пользоваться шейкером для приготовления протеиновых коктейлей? Потому что благодаря шейкеру можно получить максимально однородную массу, которая по консистенции не будет напоминать манную кашу из детского сада с жуткими комочками. Как правильно разводить протеин в шейкере? Достаточно просто налить в шейкер молоко, насыпать необходимое количество протеина, закрыть крышку и трясти шейкер до тех пор, пока масса не станет однородной. В ручных шейкерах для этого предусмотрены специальные шарики или сетки.

Состав коктейля

Если протеин разводится на молоке, тогда в состав коктейля, кроме белка, входят еще и углеводы с жирами. Многие производители обогащают свой продукт витаминами, например, витамином В. Смысла в этом мало, так как потребность в витаминах покрывается пищей и витаминными добавками. Как разводить протеин, обогащенный минеральными добавками и витаминами? Лучше всего такой протеин принимать с водой. Почему? Все очень просто. Если протеин обогащен, например, железом, то его нельзя принимать с молоком. В самом молоке содержится достаточно большое количество витаминов. Некоторые компоненты молока могут нейтрализовать компоненты протеина. Зачем же производители обогащают протеин? Ради прибыли, все просто. Если и говорить об обогащении протеина, то лучше всего добавлять в него аминокислоты.

Качество протеинового порошка

Идеальный белок для человека содержит на 1 грамм:

  • Изолейцин - 40 мг.
  • Лейцин - 70 мг.
  • Лизин - 55 мг.
  • Метионин и цистин в сумме - 35 мг.
  • Фенилаланин и тирозин в сумме - 60 мг.

Идеальным для роста считается белок, соответствующий молоку матери. Ближе всего к нему подошел сывороточный протеин. На рынке сегодня присутствуют: сыворотки, яичный белок, казеин, соя, пшеничный белок. Растительный белок является неполноценным, так, например, в пшеничном белке содержится мало лизина.

Как разводить сывороточный протеин? Так же, как и любой другой. Сывороточный протеин - это не что иное, как белки, полученные из молочной сыворотки.

Усвояемость протеина

Усвояемость обычно напрямую связана с источником белка и с аминокислотным составом. Сывороточные протеины относятся к быстроусвояемым протеинам. Они перевариваются организмом в течение 2-3 часов. Казеин — это медленный белок, хотя он усваивается быстрее соевого. Но вы не найдете белок, который будет усваиваться более 5-6 часов. Медленные белки имеют преимущество перед быстрыми в том, что они оказывают постоянное и равномерное поступление аминокислот.

Изолят сывороточного протеина

Изолят сывороточного протеина характеризуется высокой степенью очистки (более 85 % белка), в котором нет жиров и углеводов. При изготовлении изолята молочную сыворотку обезвоживают, удаляют лактозу, вредный холестерин, животный жир. Изолят помогает быстро восстановить мышцы после силовой тренировки, препятствует катаболизму и усиливает анаболизм.

Изолят, благодаря высокой очистке, менее аллергенный, чем концентрированные протеины. Эта добавка является незаменимой для бодибилдеров с непереносимостью лактозы. По сравнению с обычными изолятами, сывороточный лучше усваивается, оказывает антиоксидантное воздействие, повышает иммунитет.

100 % Whey Gold Standard - это сывороточный протеин, который достаточно распространен среди атлетов. Он идеально подходит после анаэробной тренировки. Как разводить протеин 100 % Whey Gold Standard с молоком? Для начала посчитайте, сколько белка в день вам нужно. Разделите пополам дневную норму. И из протеина потребляйте не больше половины. В идеале соотношение природного белка к протеину должно быть 2:1.

Заключение

Если вы пьете протеин 2-3 раза в день, разделите норму на эти приемы. Обычно за один прием не принимается больше одной мерной ложки, т. е. 30 грамм. Мерная ложка, кстати, обычно идет в комплекте с протеином (внутри банки), но в этом лучше лишний раз убедиться, если вы покупаете продукт неизвестного вам ранее производителя. Для наращивания мышечной массы протеин делят на 5-6 приемов. Но обычно протеин пьют 1-2 раза в день. Если вы съели блюдо, богатое белками, то протеин лучше принимать через 3-4 часа после еды.

Протеин не заменяет приемы пищи. За исключением случаев, когда вам необходимо похудеть. Тогда можно заменить тяжелым протеином, например, казеиновым, один прием пищи. За основу лучше взять кефир. Как разводить протеин с кефиром? В 250 мл кефира растворите одну ложку порошка. Воспользуйтесь шейкером (лучше всего автоматическим), чтобы порошок качественно растворился в густой основе. Размешивать протеин можно и обычной вилкой, если хорошо постараться.

Если вы собираетесь взять коктейль на тренировку, чтобы выпить его сразу после тренировки, то перелейте его в термос, чтобы он не успел закиснуть в жару или замерзнуть в сильный холод. Готовый коктейль нужно выпить в течение 3 часов. Даже если он хранится в холодильнике, лучше использовать его в течение 5 часов. Протеиновые порошки, в составе которых находится креатин, выпиваются сразу после смешивания. При длительном контакте с жидкостью аминокислота креатин быстро деградирует.

Помните, что даже самый высокоочищенный, обогащенный и дорогой протеин не сравнится с натуральной пищей. Атлеты пытались заменить приемы пищи протеином. Они выяснили, как разводить протеин, пропорции тоже были соблюдены, но вот роста мышечной массы не последовало. Это значит только то, что протеин не заменит природного белка, который должен присутствовать в ежедневном рационе.

Перед тем как начать пить протеин, посоветуйтесь со своим тренером. Он распишет ваш режим питания с учетом протеиновой добавки. Кроме этого, тренер может посоветовать вам хорошего производителя и расскажет, когда лучше употреблять сывороточный протеин, а когда казеиновый.

Если вы вегетарианец, вам подойдет соевый или пшеничный протеин. Но учитывайте то, что они, как и растения, не содержат все необходимые аминокислоты. Кроме того, соя и пшеница являются генномодифицированными растениями. А пшеница — это глютеновый белок, на который у многих есть скрытая, т. е. не установленная, аллергия. Если после приема соевого или пшеничного протеина у вас появляются неприятные ощущения (боль, вздутие, понос/запор), прекратите прием.

Как разводить протеин правильно: советы. Мужской интернет-журнал Mensweekly.ru

  • Главная
  • Блог о спортивном питании

Один из наиболее популярных продуктов спортивного питания как у профессиональных спортсменов, так и у любителей фитнеса – сывороточный протеин (например, Whey Protein от RPS Nutrition). Сегодня мы попробуем разобраться с часто встречающимися вопросами о сывороточном протеине.

Сколько времени усваивается сывороточный протеин?

Время усваивания зависит от некоторых факторов, например, употребляете вы его на голодный желудок или вместе с какой-то другой едой. В среднем на усвоение сывороточного концентрата уходит от 40 минут до 1 часа. Если вы разводите сывороточный протеин в молоке или кефире, то время усвоения может увеличиться до 1-1,5 и даже 2-х часов в зависимости от жирности молока или кефира. Надо учитывать, что в этом случае вы увеличиваете не только время усвоения, но и калорийность протеина — из диетического — высокобелкового, практически обезжиренного и низкоуглеводного — приема пищи вы превращаете его в обычную, полноценную еду!

Как правильно разбавлять протеин

Протеиннезаменимая добавка для людей, которые хотят иметь красивый мышечный рельеф, а также придать тренировкам большей эффективности. Однако при первой покупке протеина, многие не знают, как правильно его разводить. Как правильно разбавлять протеин, разбиралась редакция ХОЧУ.ua.

Оценка — 4.5 из 5 возможных на основе 2 голосов

ЧИТАЙ ТАКЖЕ — Почему не нужно бояться пить протеин

Многие девушки, которые только начинают знакомиться со спортивным питанием сталкиваются с проблемой, как правильно разводить протеин, чтобы не нарушить его основные качества. На самом деле, процесс несложный: надо просто немного приловчиться.

КАК РАЗВОДИТЬ ПРОТЕИН


Протеин — это порошок, который нужно растворить в воде, соке или молоке. На вопрос: в чем лучше растворяет протеин, ответ прост — зависит от твоих вкусовых предпочтений. Многие растворяют его в молоке (0,5-1,5% жирности), кто-то в соке. В принципе, это никак не влияет на его основные качества. Для того, чтобы порошок с легкостью растворился выбранной жидкости, лучше приобрести шейкер для спортивного питания. Во-первых, это позволит тебе взять коктейль с собой на работу, или учебу, а во вторых сэкономит время. Для приготовления коктейля в шейкере налей 200-300 мл молока, сока или воды, добавь 30 грамм протеина (3 столовые ложки без горки), и хорошо размешай. Делается это несколькими движениями шейкера вниз-вверх. Готово. Для улучшения вкуса коктейля можешь добавить в него немного меда, какао или сиропа.

Читать также: Зачем нужны спортивные энергетики и как их принимать

В принципе, количество жидкости можно регулировать до 450-500 мл. Попробуй различные варианты, чтобы определиться, какой вариант коктейля тебе больше всего нравится по вкусу. Ведь это очень важно, так как протеин — незаменимая добавка для тренирующегося человека.

Как видишь, ничего сложного в данной задаче нет. Если шейкера у тебя нет, для получения однородной массе, лучше воспользоваться блендером или миксером. В таком случае в коктейль можно добавить банан или какой-то другой фрукт, чтобы добавить вкус.

КАК ПИТЬ ПРОТЕИН


Перед тем, как начать пить протеин, необходимо проконсультироваться со своим тренером, который поможет правильно расписать режим питания и подобрать норму протеина в сутки. Как правило, она рассчитывается из формулы: вес в килограммах умножается на два. Это и есть суточная норма протеина. Ее часть должна поступать в организм с пищей, часть — с коктейлями. Тренер поможет рассчитать норму, и составить правильное меню более точно. Чаще всего в день пьется 1-2 протеиновых коктейля.

Читать также: Что такое гейнеры и как их принимать для набора массы

Главная ошибка многих новичков — пить протеин вместо основного приема пищи. Это — в корне неправильно, и не даст достойных результатов. Протеиновый коктейль может стать лишь перекусом, но никак не заменой завтрака, обеда или ужина. Пей протеиновый коктейль между завтраком и обедом, либо же между обедом и ужином вместо запланированного перекуса, а также через час после тренировки.

Автор: Наталия Вересюк

Поделиться Подписаться Подписаться

теги: фитнес тренировка протеины протеиновый коктейль спортивное питание

Loading…

С чем мешать протеин?

Можно с молоком, но лучше всего с водой. Из-за молока быстрый белок будет усваиваться медленнее, т.к. молоко содержит преимущественно медленный белок – казеин. Есть любители вкусненького, которые разводят протеин даже в кефире, йогурте, ряженке или даже в сливках! В этом случае не только увеличивается калорийность исходного продукта, но и в случае разведения в кисломолочных напитках с живой микрофлорой, возрастает риск порчи протеина, поэтому употребить его надо сразу после приготовления!

Как выбрать жидкость для разведения

Перед приготовлением смеси, также нужно определиться, с чем разводить протеин лучше.

Самым идеальным вариантом жидкости для наведения продукта, является обезжиренное молоко. Оно обогащено кальцием, полезными углеводами и большим количеством белка. Как вариант, подойдет и кефир. Чтобы смесь получилась максимально полезной, нужно знать, как разводить протеин с молоком.

Для приготовления, нужно взять от 250 до 500 мл молока. При этом важно учесть — температура жидкости должна быть комнатной. Холодная негативно отразится на пищеварении, горячая — денатурирует белок. Смесь заливается молоком, а не наоборот, иначе коктейль получится с комочками.

Часто бывает, что молочки нет под рукой либо организм ее не переносит. Тогда можно разводить протеин с водой, соком или компотом.

Если используется вода — ее обязательно нужно профильтровать, прокипятить либо разводить смесь покупной водой из бутылки — обычной или минеральной.

Не рекомендуется использовать газированные жидкости, особенно перед тренингом, а также напитки с большим содержанием консервантов, красителей, ароматизаторов.

Можно ли разводить протеин заранее и носить в разведенном виде в шейкере?

При разведении сухого протеина в воде или молоке надо обязательно учитывать тот факт, что он НЕ СОДЕРЖИТ КОНСЕРВАНТОВ и каких-либо СПЕЦИАЛЬНЫХ ДОБАВОК для продления срока его годности! Поэтому разведенный и уже готовый к употреблению протеин является высокопитательной средой для быстрого роста и размножения бактерий и дрожжей! Тем более, вероятность быстрой порчи увеличивается, когда мы оставляем протеин в плохо промытом шейкере, ведь в нем всегда есть определенная микрофлора от нашей слюны. Хранить готовый протеин во избежание возможных отравлений нельзя категорически, его нужно сразу же выпить или использовать — например, для выпечки.
К списку новостей

Занимаетесь в зале и стараетесь употреблять как можно белковой пищи, но мышечная масса не увеличивается? Конечно хотелось бы видеть результаты занятий как можно быстрее, а их все нет и нет…Для этого и нужны спортивные добавки! Одна из самых популярных как среди новичков, так и среди профи – протеин в порошке. Он восполнит дефицит белка в организме и ускорит мышечный рост. Если вы раньше никогда не употребляли его, ознакомьтесь с инструкцией по применению.

Как правильно разводить протеин: советы


Чтобы спортивная добавка принесла максимальную пользу, нужно правильно ее использовать. В противном случае, она потеряет свои полезные свойства и не окажет нужного эффекта. В продаже вы найдете протеиновый порошок в нескольких вкусах, выбор зависит от производителя. Здесь вы найдете банан, клубнику, шоколад и даже лесные ягоды! Благодаря такому разнообразию вкусов вы сможете добавлять порошок в любой коктейль.

Как разводить протеин с водой, молоком или соком? Прежде всего, ознакомьтесь с инструкцией, которую вы увидите на упаковке добавки. Там также есть сведения о составе. Но даже если вам не помогла инструкция и вы не смогли ничего понять, ознакомьтесь с нашими универсальными рекомендациями.

Вы должны определить нужное количество протеина в зависимости от ваших потребностей. На 1 кг тела достаточно 1,5-2 грамм белка (этот расчет представлен для тех, кто активно занимается спортом). Например, если ваш вес 80 кг, максимальное количество протеина, который вам необходим – до 160 грамм.

В 1 мерной ложке протеина содержится около 30 грамм белка, поэтому для приготовления 1 коктейля будет достаточно даже одной ложки. Многие хотят получить максимальный результат и по этой причине добавляют сразу 2-3 порции в напиток. Делать это ни в коем случае нельзя, так как большое количество протеина все равно не усвоится вашим организмом.


Количество жидкости (вода, сок, молоко или кефир) вы можете определить сами. На 1 порцию добавки достаточно 200 мл, можно даже больше. Если у вас шейкер с большим объемом, используйте больше жидкости, ничего страшного. В случае, если вы используете двух мерных ложки протеина, увеличьте дозировку до 500 мл.

В чем лучше разводить протеин? Лучше всего смешивать порошок с молоком или кефиром, с йогуртом. Но на крайняк подойдет сок или даже обычная вода. Такой коктейль будет не такой вкусный, но что поделаешь – все же лучше, чем ничего.

Когда принимать протеин? Чем свежее будет напиток, тем больше полезных веществ в нем сохранится. Желательно выпить его в течение 50-60 минут после приготовления, не позже. Принимать напиток можно как до, так и после занятия. Если вы принимаете его до тренировки, делать это нужно за 60 минут, а если после – через 60-90 минут.

Где делать протеиновый коктейль? Рекомендуем для этой цели приобрести шейкер, цена на него доступная и вы сможете брать его с собой куда угодно. Вам нужно будет лишь смешать нужные компоненты в нем и хорошенько тряхнуть несколько раз. В домашних условиях можно использовать блендер или миксер.

При расчете суточной дозировки не забывайте о том, что также белок есть в продуктах питания, которые вы употребляете. Именно поэтому рекомендуем не перебарщивать с количеством протеинового порошка. Также вы должны помнить о том, что от коктейлей не будет пользы, если вы не посещаете зал регулярно и не выкладываетесь на все 100%.

Мужской интернет-журнал Mensweekly.ru

Какие протеины на ночь употреблять не стоит

Считается, что быстрые протеины на ночь употреблять не стоит, их основная задача – восполнить дефицит аминокислот после тренировки. Конечно, прием изолята или гидролизата протеина на ночь вреда не нанесет, но и положительного эффекта не окажет. Получиться бесполезный перевод дорогого продукта, который в другой ситуации может принести значительную пользу.

Концентрат протеина на ночь принимать не рекомендуется по другой причине – в нем содержится достаточно большое количество лактозы и некоторое количество нейтрального жира. Во время сна эти вещества будут запасены в депо, и придется приложить дополнительные усилия для их последующей утилизации. А вам нужно наращивать интенсивность тренировок, если можно обойтись без этого?

Купить протеины можно в этом магазине.

Когда пить белок

Важно не только количество белка, полученного за день, но и время его употребления. Необходимо распределить количество вещества равномерно, учитывая особенности физической и физиологической активности организма.


Полезность перед сном
После пробуждения организм не готов к большим нагрузкам. Ему нужно равное количество белков, жиров и углеводов, поэтому важно получать полноценный завтрак. В это время луче всего употреблять быстрорастворимые добавки, которые незамедлительно восполнят запас веществ, потраченных во время сна. Небольшие порции продукта рекомендуется пить до 6 раз в сутки. Не следует забывать пить добавку за несколько часов до тренировки и сразу после нее для максимального эффекта. На ночь лучше всего пить медленные белки, например, казеин.

Как видите, употребление продукта полезно для здоровья. Особенно важно пить его перед и после тренировки. Его можно также применять на ночь, что позволит насыщать мышцы белками на протяжении ночи.

Похожие материалы

Протеин перед сном

Необходимо помнить, что во время сна все метаболические процессы в организме замедляются. Практически все питательные вещества, поступающие в это время в организм, отправляются в депо – углеводы в гликоген мышц, жиры в жировую ткань, аминокислоты – в мышцы. Поэтому задача спортивного питания в это время – обеспечить равномерное поступление аминокислот, которые будут направлены на рост мышц.

Ввиду вышеуказанных фактов предпочтительно употреблять перед сном «длинные протеины» — казеиновый протеин. Его период всасывания составляет около 5-8 часов, что соответствует средней продолжительности сна.

В том случает, если ваша последняя тренировка заканчивается за 1,5-2 часа до сна, рекомендуется на ночь принимать многокомпонентный протеин. В этом случае отмечается следующий эффект – быстрый протеин, чаще всего – сывороточный, после тренировки дает резкий аминокислотный всплеск в крови, что не дает мышцам перейти в режим катаболизма, а медленный белок — казеиновый протеин оказывает поддерживающее действие во время сна. Третий компонент комплексных белков – яичный протеин занимает промежуточное место по скорости всасывания и усвояемости, он сглаживает пики концентрации аминокислот двух предыдущих компонентов.

Лучший сывороточный протеин 2020

Для вашего удобства мы приводим ряд самых популярных и эффективных добавок. Все они отлично подходят для набора массы, в том числе профессиональными спортсменами. Если вы видите на банке протеина WHEY, значит перед вами сывороточный. При этом WPC – концентрат, WPI – изолят, WPH – гидролизат.

  • WEIDER GOLD WHEY PROTEIN
    На каждые 100 г приходится 24г белка и 23г аминокислот. Содержание сахара и жира низкое. Представлено широкое разнообразие приятных вкусов. Хорошо растворяется.
  • SAN 100% PURE TITANIUM WHEY
    Отличный вкус и премиум-качество сделали эту добавку одной из самых популярных в мире. Гарантирует эффективный набор сухой массы. Содержит дополнительные элементы для предотвращения катаболизма и активного формирования мышц.
  • DYMATIZE ELITE WHEY PROTEIN
    Хорошая смесь за умеренную цену. Предоставляет необходимую для роста и сохранения мышечной ткани концентрацию белка.
  • ULTIMATE NUTRITION PROSTAR WHEY
    Подойдет как для усердно тренирующихся атлетов, так и обычных людей, тренирующихся 1-2 раза в неделю. Лучше всего принимать после тренировки, её продолжительность значения не имеет. Позволяет не только восстановить и обеспечить рост мышц, но и укрепить иммунную систему.
  • OPTIMUM NUTRITION 100% WHEY GOLD STANDARD
    Представляет собой смесь изолята, концентрата, а также сывороточных пептидов. Содержание жиров и углеводов сведено к минимуму. Очень популярен, благодаря высокой эффективности и большому выбору вкусов.

С выбором вам также могут помочь консультанты специализированного магазина. Но и это еще не всё, теперь нужно разобраться, как добавку следует принимать.

Узнаем как развести протеин и принимать его для набора мышечной массы?

Если вы проводите часы в тренажерном зале, поднимая веса, вы, естественно, ожидаете получить большие и сильные мышцы. К сожалению, если вы не делаете тех же усилий на кухне, чтобы убедиться, что вы едите правильную пищу для поддержания вашего режима тренировок, эффект от занятий может быть немного разочаровывающим.

Под правильной пищей подразумевается белок, который необходим для восстановления поврежденных мышц. Преимущества белка не ограничиваются только наращиванием мышечной массы — он необходим для множества других важных функций организма, а также обладает способностью заставлять вас чувствовать себя сытым намного дольше, что уменьшает вероятность того, что вы обратитесь к сладким или жирным перекусам между приемами пищи.

Употребление большего количества белка обычно не является проблемой, поскольку данный макроэлемент встречается во многих вкусных продуктах. Однако получение белка, необходимого для поддержания активного образа жизни и тренировок, не всегда является простой задачей. Если вы хотите набирать 1,4-2 г белка на килограмм веса тела в день, что рекомендуется для тех, кто пытается наращивать мышцы, вам, вероятно, понадобится больше, чем куриная грудка на обед и ужин и горсть орехов на завтрак.

Протеиновые коктейли могут быть удобным способом, чтобы добрать необходимую норму белка. Они просты в приготовлении и употреблении, а также намного легче, чем тарелка с бифштексом и яйцами после тренировки. Из этой статьи вы узнаете все, что вам нужно знать о протеине, чтобы получить желаемые результаты за короткий срок и с минимальными затратами, а также то, как принимать протеин для набора мышечной массы.

Нужен ли мне протеин?

Если вы следуете какой-либо программе тренировок, независимо от того, основывается ли она на поднятии весов или кардио, вам нужно больше белка. Протеиновый порошок предлагает быстрый и простой способ увеличить его ежедневное потребление, так как развести протеин и употребить его можно за короткое время. Быстро переваривающийся белок, такой, как сыворотка, особенно полезен после тренировки. Казеин, белок с медленным высвобождением, является отличным вариантом перед сном, поскольку позволяет восстановить мышечную ткань во время отдыха организма.

Всегда важно помнить, что протеин в порошке - это дополнение к рациону, он предназначен для заполнения разрывов в питании полной и разнообразной диеты. Поскольку лучший белок находится в красном и белом мясе, рыбе, употребляя эти продукты, вы получите больше необходимых витаминов, минералов и других питательных веществ, жизненно важных для здоровья.

Как пить протеин?

Вы можете развести протеин с водой или молоком, добавить его в смузи или даже использовать в качестве ингредиента для приготовления пищи. Существует множество рецептов вкусных блюд. Как принимать протеин для набора мышечной массы? Если вы хотите набрать сухую мышечную массу, то смешивайте протеин с водой, если же вам нужно набрать также немного жира, то отдайте предпочтение молоку — коровьему или растительному.

Вот простой рецепт, который вы обязательно должны попробовать. Чтобы сделать белковые панкейки, смешайте скуп вашего любимого протеина с яйцом и бананом, а затем обжарьте на сковороде без масла.

Сколько протеина необходимо в день?

В день рекомендуется принимать около 30 г протеина. Исследования показывают, что это идеальное количество, чтобы восстановить ущерб, нанесенный тренировками, и активировать синтез мышечного белка — процесс, через который закладывается новая мышечная ткань.

Исследования также показывают, что диета с высоким содержанием белка может также помочь снизить уровень жировых отложений, поэтому вы не только станете сильным, но и более подсушенным.

Когда следует принимать протеин?

Время после тренировки является наиболее подходящим, чтобы потреблять белковый порошок, поскольку именно тогда ваши мышцы нуждаются в этом больше всего. Сывороточный протеин, смешанный с холодной водой или молоком, в течение 30 минут после окончания тренировки запустит восстановление. Аминоксилоты через кровоток начнут быстро перемещаться в ваши мышечные клетки, чтобы стать новой тканью.

Протеин можно принимать и в другое время. Например, когда вы просто не успеваете поесть, так как развести протеин гораздо быстрее, чем готовить еду. Также коктейль можно выпить перед сном, если вы поняли, что недобрали дневную норму белка.

Что еще содержится в протеине?

Многие белковые порошки содержат дополнительные ингредиенты, предназначенные для поддержания или повышения производительности и восстановления. Вот основные из них.

  • Креатин: Это органическое соединение помогает все время тренироваться с высокой интенсивностью.
  • L-карнитин: Эта аминокислота мобилизует жирные кислоты из жировых клеток, поэтому ее можно использовать для получения дополнительной энергии.
  • Ферменты: Ферменты или пробиотики помогают вашему желудку разрушать специфические соединения для лучшего усвоения питательных веществ.

Какой протеин самый лучший?

Ниже приведен рейтинг лучших протеинов.

  1. Сывороточный протеин. Сыворотка — это жидкость, оставшаяся от молока. Она является побочным продуктом процесса производства сыра. Сывороточный белковый порошок является одним из самых популярных видов спортивного питания в мире из-за его доступности и эффективности. Он быстро усваивается, затем всасывается пищеварительной системой, быстро проникает в кровоток и мышцы, инициируя процесс восстановления.
  2. Казеин. Является основным типом белка, который содержится в молочных продуктах. В то время как сывороточный белок усваивается быстро, казеин переваривается намного медленнее, в течение многих часов, чтобы обеспечить продолжительное высвобождение аминокислот в кровоток, а затем и в мышцы. Это идеальный источник белка в ночное время, чтобы создать новую мышечную массу, в то время как тело восстанавливается после тренировки.
  3. Гейнер. Если вы безуспешно пытались набрать вес, вам, возможно, потребуется рассмотреть вариант приема высококалорийного белкового порошка, который также включает значительное количество углеводов. Известный как гейнер, этот продукт может включать в себя несколько типов белка, а также быстрые и медленные углеводы, чтобы значительно увеличить калорийность рациона и помочь увеличить мышечную массу. Его обычно используют культуристы во время фазы набора массы или профессиональные спортсмены, которые сжигают огромное число калорий за тренировку. Нет лучше способа набрать вес, чем развести протеин, выпить его и пойти сразу тренироваться с весами.

сколько воды нужно для порции?

Коктейль с протеином является хорошим помощником для каждого спортсмена – это отличный способ значительно ускорить наращивание мускулатуры. Спортивное питание принимается по определенной схеме, что позволяет четко регулировать получаемую дозу белка или других полезных составляющих.

Многие новички нередко совершают ошибки – они могут перестараться с граммовкой самого порошка или же перестараться с количеством жидкости. Если что-то сделать неправильно, то невозможно получить нужный эффект. Чтобы эффективность купленного спортивного питания была максимальной – следует идти четко по инструкции. Об этом подробнее далее.

В какой воде лучше разводить протеин

Один из первых вопросов, который возникает у начинающих спортсменов, впервые столкнувшихся с протеиновыми смесями – как правильно развести коктейль. Со сложностями можно столкнуться уже на первом этапе – выборе температуры воды, которая будет использоваться для разведения порошка. Горячая или холодная вода, что же лучше? Рассмотрим этот вопрос более подробно.

В первую очередь стоит отметить, что горячая вода и протеиновый порошок – это вещи, которые крайне плохо совместимы между собой. Дело в том, что при контакте с горячей жидкостью (вне зависимости от ее природы) белки имеют свойство сворачиваться и терять свои свойства. Таким образом, уже на этапе разведения коктейль полностью потеряет все свои положительные качества.

Холодная вода не нанесет таких негативных последствий, однако, порошок разводится в ней с затруднениями. Лучше всего для приготовления протеиновых коктейлей использовать теплую воду. Этот вариант позволит получить наибольший эффект в процессе приготовления питательного напитка.

Выбор жидкости для приготовления коктейля

После того, как выбрана оптимальная температура жидкости, самое время понять, чем же лучше разбавить порошок, чтобы получить оптимальный эффект. Как показывает практика, чаще всего выбор у спортсменов встает между двумя вариантами: вода и молоко. Какой же из них лучше в какой ситуации?

Для начала рассмотрим использование для создания коктейлей обычной питьевой воды. Главным ее преимуществом является то, что полученный протеиновый коктейль усваивается в организме намного быстрее, чем при использовании других вариантов, так как сама по себе она не несет в себе никакой питательной функции и не требует затрат энергии на переработку. Подобные коктейли наиболее удачно подходят для тренировок с похудением.

В то же время протеиновые смеси на основе молока являются более медленными и, при этом, более питательными, так как в самом молоке содержится большое количество углеводов. Если основной задачей тренировки является именно набор массы, то более удачного варианта найти сложно. 

Как разводить протеин в жидкости

Как мы выяснили, не обязательно для создания эффективного коктейля за основу брать воду. Можно выбрать молоко или даже сок, в данном случае у спортсмена имеется довольно широкий выбор возможностей. Но чаще всего именно вода становится основой для будущего коктейля. Для того, чтобы правильно подготовить спортпит необходимо взять всего лишь 250-300 миллилитров воды комнатной температуры. Лучше заливать ее в шейкер, чтобы последующее перемешивание не вызвало проблем.

Внутри упаковки с протеином обязательно будет мерная ложка – с ее помощью отмеряется 30 грамм. Данный вес соответствует приблизительно трем столовым ложкам без горки. То есть сначала необходимо залить воду, а лишь потом добавлять сам протеин, не наоборот. Когда все ингредиенты оказались внутри – нужно закрыть шейкер и хорошо его взболтать движением вверх-вниз.


Можно ли увеличивать объем воды

Не обязательно придерживаться граммовки в 300 миллилитров, можно без проблем довести коктейль до объемов в 0,5 литра. Это позволяет пользователю отрегулировать густоту коктейля, получив наиболее удобоваримый вариант. При этом необходимо пропорционально увеличить дозу протеина в данной смеси. Спортсмену важно знать, что:

·        Предпочтительнее вода комнатной температуры – это ускорит процесс смешивания;

·        Можно ориентироваться на свои желания, подбирая густоту смеси;

·        Можно добавлять в смесь мед, какао или различные сиропы.

На Fitness Place спортсменам предлагаются различные варианты протеина: с ягодами, шоколадный, ванильный и так далее. То есть можно купить разнообразные решения, чтобы один вкус не приелся. Доступная стоимость спортивного питания и его высокое качество – это то, что выделяет платформу Fitness Place от конкурентов.

 

Протеин на молоке или на воде? - Все о еде и ее приготовлении

Предположим, что вы хотите приготовить себе протеиновый коктейль. Что лучше выбрать в качестве основы для коктейля: молоко или же воду? Ответ зависит от нескольких моментов, которые нужно обязательно принять во внимание:

  • молоко увеличивает общую калорийность;
  • молоко способствует всплеску инсулина;
  • молоко делает вкус коктейля лучше.

Учитывая все вышесказанное, давайте рассмотрим 2 варианта развития событий.

Вариант первый. Вы придерживаетесь диеты и желаете похудеть как можно скорее.

В таком случае, вам необходимо большую часть времени избегать дополнительных калорий, всплесков инсулина, именно поэтому протеиновые коктейли вам рекомендуем замешивать на воде. Но, тем не менее, существуют некоторые промежутки времени, в которые употребление молока не просто приемлемо, но даже, пожалуй, желательно.

Первое - по утрам чрезвычайно высока чувствительность к инсулину, а также углеводная толерантность. Вот почему немного больше калорий и инсулина не повредят вам в начале дня.

Второе – время непосредственно после тренировки. Вам необходимы после тренировки дополнительные калории и углеводы, а также всплеск инсулина, чтобы быстро были доставлены питательные вещества в мышцы для роста и восстановления. Именно поэтому в этой ситуации смешивать протеиновый коктейль на молоке вполне допустимо, если даже вы сидите на диете.

Вариант второй. Вы стремитесь набрать как можно быстрее побольше мышечной массы.

Тогда для вас вполне приемлемо смешивать почти все протеиновые коктейли на молоке, потому как это замечательный способ добавить вашему рациону калорийности. Вы можете поверить или нет, но очень многим людям, большинству, трудно на самом деле добавить в ежедневный рацион калории, чтобы было достаточно для увеличения сухой мышечной массы. Употреблять в жидкой форме калории – это отличный способ повысить ежедневную калорийность рациона и при этом не набивать свой желудок огромными порциями пищи.

Что стоит учесть еще?

1. Содержатся ли в вашем протеине углеводы?

В случае, если вы употребляете низкоуглеводный протеиновый порошок или изолят, то это вам дает больше свободы в вопросе использования молока как основы коктейля. Но если у вас более калорийный «заменитель пищи», рекомендуем вам обойтись простой чистой водой.

2. Выпиваете ли вы перед сном протеиновый коктейль?

Данный напиток отлично помогает избежать катаболизма, при этом обеспечив мышцы на ночь питательными веществами. В том числе, если вы применяете казеиновый протеин, пока вы спите, он будет подпитывать ваши мышцы. Но мощный всплеск инсулина в это время вам ни к чему, поэтому советуем вам смешивать коктейль на воде.

3. Насколько ваш протеин вкусен?

Многие используют для смешивания белковых коктейлей молоко, потому что коктейль их имеет ужасный вкус, если смешать протеин с водой. Что ж, вовсе не обязательно увеличивать калорийность, стимулируя всплеск инсулина, для того, чтобы насладиться приятным вкусом, если вы приобрели качественный протеин. Хороший протеиновый порошок отличается приятным вкусом, даже будучи смешан с холодной водой. Попробуйте поменять производителя, разные вкусы, посоветуйтесь с друзьями, вы обязательно найдете любимый протеин, который вкусен одинаково, и на молоке, и на воде.

Вообще, любой протеин можно приготовить на воде, при абсолютно любых целях его употребления, и не важно, набираете вы массу или, наоборот, снижаете свой вес. Делать на молоке коктейли имеет смысл в том случае, если вы набираете массу, нужно стараться при этом покупать молоко с пониженной калорийностью, потому что жир и бес того бесполезен и даже вреден, так еще вы и платите за то, чтобы его было как можно меньше в вашем протеиновом коктейле.

Поэтому, если вам приготовление протеина на молоке подходит, нужно выбирать молоко 1,5% жирности, а лучше 0,5%. Это молоко даст дополнительно вам до 9 г белка, до 15 г углеводов. А при низкоуглеводной диете последнее обстоятельство вовсе не плюс, об этом следует помнить.

Экспериментируйте! Есть люди, которые умудряются готовить протеин на соке, кефире, мешают с другими продуктами для питания спортсменов. Его даже можно добавлять в кашу, в этом случае в ней будет больше белка. Так что пробуйте и ищите вкус, который вам понравится.

Автор: Жанна Ш. (специально для Calorizator.ru)
Копирование данной статьи целиком или частично запрещено.

Почему изолят нельзя смешивать с молоком. Как разводить протеин с водой и молоком? Пропорции, правила приема

Протеин — это белковая пищевая добавка. Прием протеина обусловлен необходимостью набора дневной нормы белка. Это особенно касается бодибилдеров и людей, которые стремятся к построению рельефного и мощного мышечного корсета. Купив порошок в спортивном магазине, люди задаются вопросом: "А как разводить протеин?".

Как выбрать основу для разведения протеина?

Протеин обычно разводиться молоком или водой. Иногда протеин замешивают на соке, компоте, кефире, чае, лимонаде и т. д. Молоко является идеальным вариантом. Оно богато кальцием, белком и полезными углеводами. Но если есть непереносимость лактозы, то от молока придется отказаться в пользу воды или другой основы. Даже если с лактозой у вас все в порядке, учитывайте следующее:

  • молоко добавит калорийности;
  • на молоко организм реагирует резким скачком инсулина.

При всем при этом молоко улучшает вкус коктейля. Если вы соблюдаете диету, то учитывайте калорийность молока и инсулиновый ответ организма. Вам необходимо держать инсулин на низком уровне. Однако протеиновый коктейль с утра — это хорошая идея даже для худеющих, так как чувствительность к инсулину с утра высокая, и углеводная толерантность тоже высока. Если вы хотите набрать мышечную массу, то коктейль на молоке — отличное решение.

Как принимать протеин?

На упаковке продукта производитель обязательно пишет инструкцию по применению. На всех банках с протеином можно найти информацию о количестве микронутриентов и других питательных веществ, содержащихся в одной мерной ложке. Прежде чем начинать принимать, стоит ознакомиться с инструкцией к продукту. Некоторые протеины низкоуглеводные, в других достаточно много углеводов. В некоторых протеиновых порошках больше белка, чем в других.

Только ознакомившись с составом и учитывая свои дневные нормы, можно высчитать необходимое количество протеина. Однако, вне зависимости от этого, существуют общие рекомендации. Например, в дни тренировок протеин рекомендуется принимать дважды. Первый раз — за один час до начала тренировки. Это позволит защитить мышцы от распада и подкормит их во время тренировки. Второй раз — сразу после тренировки в течение получаса. В это время организму для восстановления сил нужны питательные вещества и особенно белок.

Вообще, получить дневную норму белка из протеина очень легко. Но профессионалы не рекомендуют этого делать. Лучше всего получать белок по схеме 50/50, т. е. 50 % из натуральной белковой пищи, и 50 % из протеинового порошка.

Схема приема протеина

Построение спортивного тела невозможно без белков. Все белковые смеси делятся на быстрые, медленные и комплексные.

Быстрые протеиновые смеси пьют утром и после тренировки для восполнения запасов аминокислот. Медленный протеин принимают на ночь, чтобы обеспечить клетки и ткани необходимым запасом питательных веществ. Если вы стремитесь сбросить вес, то можете заменить медленным протеином один прием пищи. Комплексные смеси можно употреблять как после тренировки, так и перед сном.

Количество белка в сутки

После тренировки "на массу" рекомендуется принять 20-40 грамм белка в течение получаса. Количество белка зависит от мышечной массы. Есть рекомендация: не принимать более 30 грамм белка за один прием пищи. Этот показатель индивидуальный. Все зависит от здоровья организма, в частности, почек, и от способности организма переварить определенное количество белка. Знайте, что съедая, например, 200 грамм куриной грудки, вы потребляете за раз 46 грамм белка.

Как рассчитать свою норму белка в сутки?

Рекомендуется в сутки потреблять 2-3 грамма белка на 1 кг веса. Для женщин эта норма немного меньше, чем для мужчин. Так, если вы женщина весом 60 кг, то дневная норма белка для вас составляет 120 грамм. Из них 60 грамм вы можете получать из протеинового порошка. Если вы мужчина, весом 60 кг, то вы вполне можете потреблять 180 грамм белка в сутки. Из них 90 грамм должны приходиться на натуральную пищу (куриная грудка, сыр, творог, молоко, яйца и прочие высокобелковые продукты).

Как разводить протеин?

Обычно одна мерная ложка составляет 30 грамм. Стандартов по пропорциям не существует. Все зависит от вкусовых предпочтений. Чем больше порошка и меньше основы, тем слаще будет коктейль. Многое зависит и от самой основы. Например, коктейли на молоке слаще, чем на воде.

Итак, как разводить протеин с молоком? пропорции и количество указаны ниже.

На смесь получается достаточно сладкой, поэтому рекомендуется одну мерную ложку, т. е. около 30 грамм, разводить в 500 мл молока. Если вы собираетесь выпить две мерные ложки, то вам потребуется литр молока. Если говорить о том, как правильно разводить протеин с молоком, то можно рекомендовать либо использовать большой объем жидкости (1 литр), либо смешать молоко с водой, чтобы не было приторно сладко.

Для приготовления коктейля нужно брать молоко невысокой жирности.

Второй по популярности основой для разведения протеинового порошка является вода.

С водой? Точно так же, как и с молоком, только нужно учитывать вкусовые особенности. Разводить протеин с водой, как рекомендуют это профессиональные атлеты и производители протеиновых смесей, лучше всего в ручном шейкере. Шейкеры можно купить в тех же спортивных магазинах, что и протеин.

Как разводить протеин с водой? Пропорции и количество очень важны. На воде протеин получается менее сладким. На одну будет достаточно 200-250 мл воды. А для двух мерных ложек хватит и 500 мл. Для этого используется негазированная минеральная, очищенная либо кипяченая вода.

Как разводить протеин в шейкере?

Почему многие рекомендуют пользоваться шейкером для приготовления протеиновых коктейлей? Потому что благодаря шейкеру можно получить максимально однородную массу, которая по консистенции не будет напоминать манную кашу из детского сада с жуткими комочками. Как правильно разводить протеин в шейкере? Достаточно просто налить в шейкер молоко, насыпать необходимое количество протеина, закрыть крышку и трясти шейкер до тех пор, пока масса не станет однородной. В ручных шейкерах для этого предусмотрены специальные шарики или сетки.

Состав коктейля

Если протеин разводится на молоке, тогда в состав коктейля, кроме белка, входят еще и углеводы с жирами. Многие производители обогащают свой продукт витаминами, например, витамином В. Смысла в этом мало, так как потребность в витаминах покрывается пищей и витаминными добавками. Как разводить протеин, обогащенный минеральными добавками и витаминами? Лучше всего такой протеин принимать с водой. Почему? Все очень просто. Если протеин обогащен, например, железом, то его нельзя принимать с молоком. В самом молоке содержится достаточно большое количество витаминов. Некоторые компоненты молока могут нейтрализовать компоненты протеина. Зачем же производители обогащают протеин? Ради прибыли, все просто. Если и говорить об обогащении протеина, то лучше всего добавлять в него аминокислоты.

Качество протеинового порошка

Идеальный белок для человека содержит на 1 грамм:

  • Изолейцин - 40 мг.
  • Лейцин - 70 мг.
  • Лизин - 55 мг.
  • Метионин и цистин в сумме - 35 мг.
  • Фенилаланин и тирозин в сумме - 60 мг.

Идеальным для роста считается белок, соответствующий молоку матери. Ближе всего к нему подошел сывороточный протеин. На рынке сегодня присутствуют: сыворотки, яичный белок, казеин, соя, пшеничный белок. является неполноценным, так, например, в пшеничном белке содержится мало лизина.

Как разводить сывороточный протеин? Так же, как и любой другой. Сывороточный протеин - это не что иное, как белки, полученные из молочной сыворотки.

Усвояемость протеина

Усвояемость обычно напрямую связана с источником белка и с аминокислотным составом. Сывороточные протеины относятся к быстроусвояемым протеинам. Они перевариваются организмом в течение 2-3 часов. Казеин — это медленный белок, хотя он усваивается быстрее соевого. Но вы не найдете белок, который будет усваиваться более 5-6 часов. Медленные белки имеют преимущество перед быстрыми в том, что они оказывают постоянное и равномерное поступление аминокислот.

Изолят сывороточного протеина

Характеризуется высокой степенью очистки (более 85 % белка), в котором нет жиров и углеводов. При изготовлении изолята молочную сыворотку обезвоживают, удаляют лактозу, вредный холестерин, животный жир. Изолят помогает быстро восстановить мышцы после силовой тренировки, препятствует катаболизму и усиливает анаболизм.

Изолят, благодаря высокой очистке, менее аллергенный, чем концентрированные протеины. Эта добавка является незаменимой для бодибилдеров с непереносимостью лактозы. По сравнению с обычными изолятами, сывороточный лучше усваивается, оказывает антиоксидантное воздействие, повышает иммунитет.

100 % Whey Gold Standard - это сывороточный протеин, который достаточно распространен среди атлетов. Он идеально подходит после анаэробной тренировки. Как разводить протеин 100 % Whey Gold Standard с молоком? Для начала посчитайте, сколько белка в день вам нужно. Разделите пополам дневную норму. И из протеина потребляйте не больше половины. В идеале соотношение природного белка к протеину должно быть 2:1.

Заключение

Если вы пьете протеин 2-3 раза в день, разделите норму на эти приемы. Обычно за один прием не принимается больше одной мерной ложки, т. е. 30 грамм. Мерная ложка, кстати, обычно идет в комплекте с протеином (внутри банки), но в этом лучше лишний раз убедиться, если вы покупаете продукт неизвестного вам ранее производителя. Для наращивания мышечной массы протеин делят на 5-6 приемов. Но обычно протеин пьют 1-2 раза в день. Если вы съели блюдо, богатое белками, то протеин лучше принимать через 3-4 часа после еды.

Протеин не заменяет приемы пищи. За исключением случаев, когда вам необходимо похудеть. Тогда можно заменить тяжелым протеином, например, казеиновым, один прием пищи. За основу лучше взять кефир. Как разводить протеин с кефиром? В 250 мл кефира растворите одну ложку порошка. Воспользуйтесь шейкером (лучше всего автоматическим), чтобы порошок качественно растворился в густой основе. Размешивать протеин можно и обычной вилкой, если хорошо постараться.

Если вы собираетесь взять коктейль на тренировку, чтобы выпить его сразу после тренировки, то перелейте его в термос, чтобы он не успел закиснуть в жару или замерзнуть в сильный холод. Готовый коктейль нужно выпить в течение 3 часов. Даже если он хранится в холодильнике, лучше использовать его в течение 5 часов. в составе которых находится креатин, выпиваются сразу после смешивания. При длительном контакте с креатин быстро деградирует.

Помните, что даже самый высокоочищенный, обогащенный и дорогой протеин не сравнится с натуральной пищей. Атлеты пытались заменить приемы пищи протеином. Они выяснили, как разводить протеин, пропорции тоже были соблюдены, но вот роста мышечной массы не последовало. Это значит только то, что протеин не заменит природного белка, который должен присутствовать в ежедневном рационе.

Перед тем как начать пить протеин, посоветуйтесь со своим тренером. Он распишет ваш режим питания с учетом протеиновой добавки. Кроме этого, тренер может посоветовать вам хорошего производителя и расскажет, когда лучше употреблять сывороточный протеин, а когда казеиновый.

Если вы вегетарианец, вам подойдет соевый или пшеничный протеин. Но учитывайте то, что они, как и растения, не содержат все необходимые аминокислоты. Кроме того, соя и пшеница являются генномодифицированными растениями. А пшеница — это глютеновый белок, на который у многих есть скрытая, т. е. не установленная, аллергия. Если после приема соевого или пшеничного протеина у вас появляются неприятные ощущения (боль, вздутие, понос/запор), прекратите прием.

Мы создаем практически любые сайты от продающих страниц до сложных, высоконагруженных и нестандартных веб приложений! Наши сайты это надежные маркетинговые инструменты для успеха Вашего бизнеса и увеличения вашей прибыли! Мы делаем красивые и максимально эффектные сайты по доступным ценам уже много лет!

Что нужно сделать, чтобы заказать создание сайта у нас?

Ну для начала вам нужно представлять (хотя бы в общих чертах), что вы хотите получить от сайта и возможно каким вы хотите его видеть. А дальше все просто. Позвоните нам или оставьте заявку нашим менеджерам, чтобы они связались с Вами, проконсультировали и помогли определиться с подходящим именно Вам сайтом по цене, сроку, дизайну или функционалу. Если вы все ещё не уверены, какой сайт вам нужен, просто обратитесь к нам! Мы вместе проанализируем вашу ситуацию и определим максимально эффективный для вас вариант.

Для всех тарифных планов на создание и размещение сайтов включено:
  • Создание сайта cо всем необходимым прикладным функционалом. В дальнейшем все сайты можно развивать и расширять функционал под ваши нужды.
  • Современный дизайн главной и внутренних страниц сайта. Высокопрофессиональная, адаптивная и кроссбраузерная верстка с учетом всех требований юзабилити и адаптивности к различным браузерам и устройствам.
  • Создание структуры сайта. Предварительное наполнение его информацией.
  • Базовая SEO оптимизация сайта для поисковых систем и юзабилити оптимизация для пользователей.
  • Регистрация сайта в поисковых системах и установка систем сбора статистики и аналитики.
  • Регистрация уникального доменного имени.
  • Размещение сайта в Интернете сроком на 1 календарный год (Хостинг сайта, предоставление системы управления сайтом (кроме "сайта-страницы" и "посадочной страницы"), регистрация доменного имени сроком на 1 календарный год).
  • Гарантийная техническая поддержка сайта. И бонусные бесплатные часы работы наших специалистов: контент-менеджеров и программистов.
  • Техническая поддержка и консультационная поддержка проекта в неограниченном объеме.
  • Поддержка постоянной работоспособности и безопасности сайта.
  • Защита от вирусов и DDos атак. Проверка на вирусы.
  • Неограниченный трафик. Неограниченный трафик не распространяется на сайты файловых архивов (графических, музыкальных, программных)
  • Почтовый сервис: Защита от вирусов, спам-фильтры. Почтовые ящики, возможно подключение к сайту Веб почты Яндекс или Google GMAIL...
  • Резервное копирование сайтов и возможность их оперативного восстановления.
  • И многое другое...
  • Таким образом, мы предлагаем комплексные пакетные решения по разработке веб-ресурсов для ведения онлайн-бизнеса.
    Вы платите один раз и получаете готовый инструмент для развития вашего бизнеса и продаж в Интернете!

Многие люди, купившие протеин, и до этого не сталкивавшиеся со спортивным питанием, задаются вопросом «как разводить протеин?». В этой статье мы рассмотрим, как это делать правильно.

Вообще, обычно вместе с упаковкой спортивного питания, идет краткая инструкция, как разводить протеин: сколько порошка смешивать с жидкостью, какая дневная порция и т.д. Однако, этой инструкции порой не достаточно или она не переведена на русский язык. Также, в зависимости от страны-изготовителя, могут использоваться непривычные нам единицы измерения.

Как разводить протеин: пропорции

В большинстве случаев разводить протеин очень просто: нужно набрать мерную ложку сухого порошки и смешать его с достаточным количеством жидкости. В одной мерной ложке содержится примерно 30 гр протеина. Каких-то стандартов в каких пропорция разводить протеин нет: можно использовать на 1 мерную ложку (30 грамм) как 200 так и 500 мл жидкости.

Как разводить протеин, чтобы он не был приторно сладким? Да очень просто: используйте больший объем жидкости.

Как разводить протеин с молоком

Чаще всего рекомендуется разводить протеин с молоком. В этом случае, в коктейле будут содержаться полезные вещества из молока: белки и углеводы. А вот с жирами лучше быть осторожным: для построения качественной мускулатуры лучше разводить протеин в нежирном или обезжиренном молоке.

Как разводить протеин с водой

Вода — вторая по популярности жидкость для разведения протеина, после молока. Разводить протеин в воде следует точно так же, как и в молоке. Учитывайте то, что в молоке содержится лактоза (молочный сахар), а в воде его нет, и при разведении протеина в аналогичных пропорциях вкус может оказаться менее насыщенным.

Как разводить протеин в шейкере

Производителями гейнера рекомендуется разводить протеин в шейкере, так как в шейкере можно получить максимально однородную массу, без комочков. Просто загрузите компоненты протеинового коктейля в шейкер, закройте его и потрясите его до тех пор, пока масса не станет однородной.

Купив протеиновую смесь, многие атлеты сталкиваются с вопросом - как разводить протеин правильно? Действительно, при неверном разведении добавки, коктейль не только будет неприятно пить, но и могут возникнуть проблемы с пищеварением. Обычно, на упаковках есть особые указания производителей - как разбавлять протеин конкретной марки , когда лучше принимать и в какой порционной дозировке. Однако далеко не всегда инструкция на русском языке, да и мерные значения могут оказаться непонятными для жителей конкретной страны.

На самом деле, наводить смесь легко, достаточно иметь под рукой чистую емкость и миксер либо шейкер, который продается в любом магазине спортпита. Мерная ложка, при помощи которой рассчитывают порцию порошка, обычно находится в упаковке продуктов, но на крайний случай, можно взять обычную столовую и отмерять добавку «без горки».

Перед приготовлением смеси, также нужно определиться, с чем разводить протеин лучше.

Самым идеальным вариантом жидкости для наведения продукта, является обезжиренное молоко . Оно обогащено кальцием, полезными углеводами и большим количеством белка. Как вариант, подойдет и кефир. Чтобы смесь получилась максимально полезной, нужно знать, как разводить протеин с молоком.

Для приготовления, нужно взять от 250 до 500 мл молока. При этом важно учесть - температура жидкости должна быть комнатной. Холодная негативно отразится на пищеварении, горячая - денатурирует белок. Смесь заливается молоком, а не наоборот, иначе коктейль получится с комочками.

Часто бывает, что молочки нет под рукой либо организм ее не переносит. Тогда можно разводить протеин с водой, соком или компотом .

Если используется вода - ее обязательно нужно профильтровать, прокипятить либо разводить смесь покупной водой из бутылки - обычной или минеральной.

Как размешивать добавку

Правильно размешивать протеин в шейкере . Это самый удобный вариант для получения однородной смеси. Шейкер - это такой мерный стаканчик с удобной крышкой и закрывающимся носиком, через который добавку можно наливать либо просто пить. После того, как все ингредиенты помещаются в него, крышку плотно закрывают и поступательными плавными движениями, встряхивают стаканчик вверх-вниз до полноценного размешивания.

Размешать протеиновый коктейль без шейкера тоже можно. Для этого используется емкость с высокими бортиками и миксер либо самая обычная вилка. Самое главное, после употребления, необходимо тщательно вымыть всю используемую посуду, не допуская закисания остатков коктейля.

Однако мало знать, как размешивать протеин, необходимо еще учесть правила его хранения .

Если вы собираетесь взять напиток на тренинг, лучше всего поместить его в небольшой термос, чтобы он не успел охладиться в холодное время года или закиснуть в жару. Дома смесь нужно хранить в холодильнике, однако, не более 3-5 часов. Протеины в составе которых находится креатин, употребляются сразу после наведения, так как эта аминокислота при длительном контакте с жидкостью, очень быстро деградирует.

Если знать, как правильно разводить протеиновый коктейль, добавка окажет максимальную пользу и наиболее полноценно усвоится в организме.

Самые популярные вопросы:

- Можно ли разводить протеин в кефире?

Да, кефир является молочным продуктом, содержащим в своем составе аминокислоты, а также кисломолочные бактерии, способствующие улучшению усвоения добавки. А кроме того, кефир идеальный продукт для страдающих непереносимостью лактозы.

- Можно ли разводить протеин с соком?

Можно. В соке содержится фруктоза, а также большое количество витаминов, минералов и прочих питательных веществ. А, кроме того, вкусовые свойства протеина, при разведении с соком, значительно улучшаются.

- Как разводить протеин: пропорции?

Обычно это от 250 мл и больше, жидкости, которой разбавляют 20-30 грамм сухой смеси. Главное, не превышать суточную норму белка, которая рассчитывается по формуле - 2 г\кг веса собственного тела.

- В какой воде растворять протеин?

Протеин нужно растворять в кипяченой, минеральной либо отфильтрованной негазированной, теплой воде.

- Чем лучше разводить протеин водой или молоком?

Протеин лучше разводить в молоке, так как оно богато аминокислотами и углеводами, незаменимыми для роста мышечной массы в период активного тренинга.

Видео

Сбалансированное - это та основа основ, которая позволяет организму функционировать правильно, что дает возможность полно и долго без заболеваний. В профессиональном помогает достичь необходимых результатов в максимально сжатые сроки. Когда обычные пищевые не справляются со своей задачей, спортсмен остро нуждается в дополнительных пищевых добавках, без которых в современном мире набрать желаемую форму становится практически нереально.

Решением проблемы недостатка пищевых веществ занимается , среди которого наибольшую популярность приобрел . Протеиновые смеси дают возможность создать сильную и объемную мускулатуру, соблюдая правильный баланс организма между липидами, и другими компонентами. Это дает возможность отказаться от вредных , употребляя только полезные компоненты.

Однако даже сегодня многие спортсмены чувствуют недостаток спортивной информации по правильному употреблению протеинов, а вопрос, как пить протеин, с каждым годом становится все острее. В этой статье мы попытаемся разрушить все мифы и предоставить только правильный путь к достижению здоровой спортивной формы.

Основные виды протеина

Протеин, либо белок, является основой , поэтому какой бы ни была изнурительной и правильной , без необходимого количества усваиваемого белка рост мускулатуры будет замедленным и практически невозможным.

Организм человека не в силах употребить с обычной пищей ту необходимую норму, которая описана спортивными диетологами. В этом случае и употребляют белок в концентрированной форме, среди которых особую популярность приобрели все несколько видов.

Быстрые протеины (сывороточный)

Важно! При употреблении казеина для похудения важно помнить, что это довольно калорийное вещество. Его питательная ценность составляет 360 ккал/100 г сухого вещества.

Когда пить?

При похудении этот протеин принимают от 2 до 4 раз в сутки с утра, в перерывах между приемами пищи и на ночь. При наборе мышечной массы рекомендуется принимать казеин 1 раз в сутки и исключительно на ночь, что помогает снизить процессы денатурации белковых соединений в организме во время сна.
Это является единственной рекомендацией по правильному использованию этого белка для увеличения мускулатуры, так как пить казеиновый протеин только для набора мышечной массы - бесполезное занятие . Для роста мышц необходимы исключительно быстро усваиваемые белки.

Как разводить?

Богатый белками казеиновый коктейль готовят по той же процедуре, что и сывороточный. О том, как нужно разводить протеин с , либо , писалось выше, поэтому детально останавливать на этом не будем. Напомним, что все компоненты помещаются в специальный шейкер или посуду для блендера и тщательно перемешиваются до однородной массы. Принимать готовый коктейль советуют сразу и не более чем через несколько часов после приготовления.

Многокомпонентные либо комплексные протеины принимаются как основное питательное вещество либо в случае подпитки организма в период между тренировками.
Кроме комплексного воздействия, этот вид спортивного питания предлагает удобство в применении, так как употреблять такой протеин для похудения можно так же эффективно, как и для набора мышечной массы. При этом нужно не забывать о быстрых белках, несмотря на то, что при покупке комплексного протеина вы получаете максимально богатое вещество.

Сколько принимать?

Норма приема многокомпонентных протеинов составляет 30–60 г за один прием. Этот диапазон связан с тем, что разного рода белки в смеси усваиваются на протяжении 1–6 часов. Применять такое спортивное питание можно не более 3 раз в сутки в обычный день, а в тренировочные дни дозу увеличивают.

Время приема

Идеальное время для применения протеина - за полчаса до . Эта процедура позволит восстановиться организму во время и устранить негативное влияние гормональной системы на мышечную массу.
Также полезно пить протеиновый коктейль многокомпонентного состава за 2 часа до тренировки. Это поможет запастись организму дополнительными аминокислотами. Полезно принимать комплексный протеин между приемами пищи, он отлично утоляет голод и снабжает организм всеми необходимыми полезными веществами.

Знаете ли вы? Всего 30 г комплексного протеина по количеству питательных веществ могут заменить полноценный прием пищи. Этим свойством пользуются многие спортсмены при борьбе с лишним весом.

Способы приготовления

Способ приготовления комплексного протеина не отличается от описанных выше для сывороточного и казеинового.

Но главной рекомендацией является то, что нужную дозу порошка необходимо смешивать с нежирными жидкостями - это главный секрет использования спортивного питания для похудения.
В связи с тем, что комплексные протеины в составе имеют много липидов, излишние жиры в могут затормозить процессы снижения веса.

Где содержится протеин: список продуктов

Традиционным источником белка считаются . Несмотря на количество и качество употребляемого спортивного питания, без правильной результаты спортсмена будут невелики.

Наиболее богатыми источниками естественного белка являются :

  • греческий - 10 г/100 г продукта;
  • творог - 20 г/100 г продукта;
  • швейцарский - 30 г/100 г продукта;
  • говяжий стейк - 40 г/100 г продукта;
  • мясной фарш - 20 г/100 г продукта;
  • свинина - 30 г/100 г продукта;
  • куриная грудка- 30 г/100 г продукта;
  • грудка индейки - 30 г/100 г продукта;
  • желтоперый тунец - 30 г/100 г продукта;
  • палтус - 28 г/100 г продукта;
  • осьминог - 31 г/100 г продукта;
  • сардины - 25 г/100 г продукта.

Также стоит отметить, что белками богаты бобы, все виды , проростки пшеницы, арахисовое масло, бастурма, ростбиф.

Какой протеин лучше?

На сегодняшний день об исключительной важности одного вида белка над другим говорить не приходится. В зависимости от свойств, спортсмен может самостоятельно определять потребности того или иного вида спортивного питания.

Сывороточный белок - это незаменимое вещество перед тренировкой. С его помощью можно мгновенно получить необходимое количество нужного белка. Поэтому его стоит пить каждый день до и перед тренировкой, а также после сна.
Без казеина добиться идеальной формы будет тяжело. Только с помощью этого белка удастся уменьшить голод и уберечь от губительных процессов катаболизма.

Многокомпонентные белковые смеси просто незаменимы для начинающих спортсменов, перед которыми стоит цель подготовиться к дальнейшим изнурительным нагрузкам. Только этот тип спортивного питания поможет новичку разобраться в необходимости тех или иных питательных компонентов для построения идеального тела, а также поможет понять, для чего и когда нужно пить протеин, - до или после тренировки.

Всем ли можно употреблять продукт?

Бытует мнение, что все протеины в той или иной степени вредны для организма. Также существует множество статей в сети о вреде спортивного питания на и почки.
Существуют даже такие абсурдные мнения, что спортивное питание вызывает зависимость. Но на самом деле протеины безопасны для организма. Такого рода белковые соединения можно пить в любом возрасте как для спортивного эффекта, так и для обогащения рациона.

Содержащийся в спортивном питании белок имеет естественное происхождение, пройдя множество процессов очистки, протеин становится чистейшим питательным веществом. По своей сути это производное того, то мы употребляем каждый день.
Однако стоит не забывать об индивидуальности каждого организма. Очень редко, но все же случаются случаи непереносимости протеинов. Клинические проявления заключаются в и диарее, поэтому при любых расстройствах организма после применения спортивного питания следует обратиться к врачу.

В этой статье мы рассмотрели, что такое белковое спортивное питание и как правильно его употреблять для набора мышечной массы. Какой бы вы вид спортивного белка вы ни выбрали, главное - помнить: все должно быть в меру, и, кроме модных и дорогих препаратов для спорта, нужно не забывать и о богатой , а также о самом главном - правильном тренировочном процессе.

Как разводить протеин правильно в шейкере и без, как разбавлять и размешивать протеиновый коктейль с водой, молоком

Купив протеиновую смесь, многие атлеты сталкиваются с вопросом — как разводить протеин правильно? Действительно, при неверном разведении добавки, коктейль не только будет неприятно пить, но и могут возникнуть проблемы с пищеварением. Обычно, на упаковках есть особые указания производителей — как разбавлять протеин конкретной марки, когда лучше принимать и в какой порционной дозировке. Однако далеко не всегда инструкция на русском языке, да и мерные значения могут оказаться непонятными для жителей конкретной страны.

На самом деле, наводить смесь легко, достаточно иметь под рукой чистую емкость и миксер либо шейкер, который продается в любом магазине спортпита. Мерная ложка, при помощи которой рассчитывают порцию порошка, обычно находится в упаковке продуктов, но на крайний случай, можно взять обычную столовую и отмерять добавку «без горки».

Как выбрать жидкость для разведения

Перед приготовлением смеси, также нужно определиться, с чем разводить протеин лучше.

Самым идеальным вариантом жидкости для наведения продукта, является обезжиренное молоко. Оно обогащено кальцием, полезными углеводами и большим количеством белка. Как вариант, подойдет и кефир. Чтобы смесь получилась максимально полезной, нужно знать, как разводить протеин с молоком.

Для приготовления, нужно взять от 250 до 500 мл молока. При этом важно учесть — температура жидкости должна быть комнатной. Холодная негативно отразится на пищеварении, горячая — денатурирует белок. Смесь заливается молоком, а не наоборот, иначе коктейль получится с комочками.

Часто бывает, что молочки нет под рукой либо организм ее не переносит. Тогда можно разводить протеин с водой, соком или компотом.

Если используется вода — ее обязательно нужно профильтровать, прокипятить либо разводить смесь покупной водой из бутылки — обычной или минеральной.

Не рекомендуется использовать газированные жидкости, особенно перед тренингом, а также напитки с большим содержанием консервантов, красителей, ароматизаторов.

 

Как размешивать добавку

Правильно размешивать протеин в шейкере. Это самый удобный вариант для получения однородной смеси. Шейкер — это такой мерный стаканчик с удобной крышкой и закрывающимся носиком, через который добавку можно наливать либо просто пить. После того, как все ингредиенты помещаются в него, крышку плотно закрывают и поступательными плавными движениями, встряхивают стаканчик вверх-вниз до полноценного размешивания.

Размешать протеиновый коктейль без шейкера тоже можно. Для этого используется емкость с высокими бортиками и миксер либо самая обычная вилка. Самое главное, после употребления, необходимо тщательно вымыть всю используемую посуду, не допуская закисания остатков коктейля.

Однако мало знать, как размешивать протеин, необходимо еще учесть правила его хранения.

Если вы собираетесь взять напиток на тренинг, лучше всего поместить его в небольшой термос, чтобы он не успел охладиться в холодное время года или закиснуть в жару. Дома смесь нужно хранить в холодильнике, однако, не более 3-5 часов. Протеины в составе которых находится креатин, употребляются сразу после наведения, так как эта аминокислота при длительном контакте с жидкостью, очень быстро деградирует.

Если знать, как правильно разводить протеиновый коктейль, добавка окажет максимальную пользу и наиболее полноценно усвоится в организме.

Самые популярные вопросы:

Можно ли разводить протеин в кефире?

— Да, кефир является молочным продуктом, содержащим в своем составе аминокислоты, а также кисломолочные бактерии, способствующие улучшению усвоения добавки. А кроме того, кефир идеальный продукт для страдающих непереносимостью лактозы.

Можно ли разводить протеин с соком?

— Можно. В соке содержится фруктоза, а также большое количество витаминов, минералов и прочих питательных веществ. А, кроме того, вкусовые свойства протеина, при разведении с соком, значительно улучшаются.

Как разводить протеин: пропорции?

— Обычно это от 250 мл и больше, жидкости, которой разбавляют 20-30 грамм сухой смеси. Главное, не превышать суточную норму белка, которая рассчитывается по формуле — 2 г\кг веса собственного тела.

— В какой воде растворять протеин?

— Протеин нужно растворять в кипяченой, минеральной либо отфильтрованной негазированной, теплой воде.

— Чем лучше разводить протеин водой или молоком?

— Протеин лучше разводить в молоке, так как оно богато аминокислотами и углеводами, незаменимыми для роста мышечной массы в период активного тренинга.

Видео


Читайте также:




Загрузка...

SolCalc Help: Разбавление белкового раствора

4.1. Как разбавить основной раствор протеина?

Бычий сывороточный альбумин (БСА) представляет собой одну полипептидную цепь, состоящую примерно из 583 аминокислотных остатков и не содержащую углеводов. При pH 5-7 он содержит 17 внутрицепочечных дисульфидных мостиков и 1 сульфгидрильную группу. Теоретическая относительная молекулярная масса БСА по аминокислотной последовательности составляет 66 399. Альбумин - один из наиболее широко используемых белков в современных биологических исследованиях. Он действует как мощный антиоксидант в клеточной культуре.

Чтобы измерить и построить стандартную кривую зависимости концентрации белка от оптической плотности при 595 нм, необходимо приготовить серию разведений исходного раствора стандарта белка BSA. Исходные растворы используются для экономии времени на приготовление, экономии материалов, уменьшения пространства для хранения и повышения точности приготовления рабочих растворов с более низкой концентрацией. Самый простой способ определить объем исходного раствора белка, необходимый для каждого разведения, - это использовать формулу C1V1 = C2V2.

Задача: Постройте калибровочную кривую, построив график зависимости среднего поглощения для каждой стандартной концентрации от целевой концентрации белка. Концентрация основного раствора (C1) составляет 100 мг / л, а объем разбавленной пробы фиксируется на уровне 2 мл (V2). Стандарты белков должны быть приготовлены в том же буфере, что и анализируемые образцы. Удобную стандартную кривую можно построить с использованием бычьего сывороточного альбумина с концентрациями 0, 10, 20, 30, 40, 50 мг / л.

                    == SolCalc - Лабораторный отчет ==
                      30 сентября 2012 г. 10:46:02

BSA
y (BSA) = 30 мг / л
=======================
Чтобы приготовить 2 мл раствора BSA с концентрацией 30 мг / л, нам потребуется развести 0,6 мл.
100 мг / л BSA до конечного объема 2 мл с деионизированной (дистиллированной) водой.


ИСТОЧНИК:
-------------
    Имя: BSA
    Формула: BSA
    Вес формулы: 66399 г / моль


РАСЧЕТ:
-------------
Ключевой принцип заключается в том, что количество растворенного вещества в желаемом растворе должно быть равным
к количеству растворенного вещества в исходном растворе.Помните, что концентрация - это
количество растворенного вещества, деленное на объем раствора.

Прежде чем производить какие-либо расчеты, мы должны убедиться, что используем только одну систему.
и одна единица измерения. ЗАПРЕЩАЕТСЯ смешивать системы измерения и единицы измерения.

    Желаемое решение:
    V0 = 2 мл * (1 л) / (1000 мл) = 0,002 л
    y0 = 30 мг / л * (1 г / л) / (1000 мг / л) = 0,03 г / л
    Исходные решения:
    y1 = 100 мг / л * (1 г / л) / (1000 мг / л) = 0,1 г / л
    --------------------------------

Сначала рассчитываем концентрацию искомого раствора.

    c0 = y (BSA) / M (BSA)
    c0 = 0.03 г / л / 66399 г / моль
    c0 = 4,51814e-007 моль / л

Затем определяем концентрацию исходного (маточного) раствора

    c1 = y (BSA) / M (BSA)
    c1 = 0,1 г / л / 66399 г / моль
    c1 = 1,50605e-006 моль / л

Поскольку общее количество растворенного вещества одинаково до и после разбавления, объем
необходимого стандартного раствора

    V1 = V0 * c0 / c1
    V1 = 0,002 л * 4,51814e-007 моль / л / 1,50605e-006 моль / л
    V1 = 0,0006 л

Чтобы преобразовать результат в желаемую единицу, мы снова воспользуемся анализом размеров.

    V (100 мг / л BSA) = 0.0006 л * (1000 мл) / (1 л) = 0,6 мл


ПРОЦЕДУРА:
-------------
Прежде всего, заполните мерную колбу примерно наполовину деионизированной водой, чтобы избежать
бурные реакции. НИКОГДА не добавляйте воду в концентрированную кислоту.

Выберите чистую пипетку подходящего размера и переложите жидкость в мерную
колба. Когда весь раствор будет слит, прикоснитесь к кончику пипетки, чтобы
сторона мерной колбы, позволяющая стечь остаткам жидкости.
НЕ выдувайте оставшийся раствор.

Дайте раствору достичь комнатной температуры, потому что мерная колба только
точен при температуре, при которой он был откалиброван (обычно 20 ° C).Очень
осторожно наполните колбу до отметки на горлышке колбы, используя капельницу.
пипеткой, чтобы добавить последние несколько миллилитров жидкости. Тщательно перемешайте раствор,
переворачивая колбу и встряхивая. НИКОГДА не держите большие мерные колбы за горлышко.
в одиночку - обеспечьте опору внизу.

Перелейте приготовленный раствор в чистую сухую бутыль для хранения и промаркируйте ее. НИКОГДА
хранить растворы в мерной колбе.


ЗАМЕЧАНИЯ ПО БЕЗОПАСНОСТИ:
-------------
- При приготовлении химических растворов всегда используйте соответствующее защитное оборудование.- Как правило, всегда добавляйте более концентрированный раствор к менее
концентрированный раствор.
- Со всеми химическими веществами, с которыми вы не знакомы, следует обращаться с особой осторожностью.
и считается легковоспламеняющимся и токсичным.


ОТКАЗ ОТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ:
-------------
Используйте SolCalc на свой страх и риск! Если вы не понимаете результатов, НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ их.

=======================
https://www.periodni.com

 

Измерение концентрации белка без разбавления для образцов с высокой концентрацией белка

Поглощение при 320 нм вычитается для учета светорассеяния тестируемым образцом из-за агрегации и должно быть низким по сравнению с поглощением при 280 нм.Согласно уравнению, измеренная концентрация обратно пропорциональна длине пути абсорбционной ячейки (кюветы), используемой для измерения абсорбции. Например, для бычьего сывороточного альбумина (БСА) со значением абсорбции 0,667 мл мг -1 см -1 диапазон концентраций от 0,3 до 1,8 мг / мл может быть измерен с использованием стандартного спектрофотометра с 1- сантиметр длины пути, предполагая максимальное поглощение около 1,2 в спектрофотометре. Пределы поглощения или линейный динамический диапазон спектрофотометра ограничены шумом и рассеянным светом и зависят от типа используемого детектора.Следует отметить, что поглощение кюветой и буферным раствором, используемым для гашения спектрофотометра, является частью общего поглощения и должно учитываться.

Для описанного BSA, если длина пути ячейки уменьшается в пять раз до 0,2 см, измеряемый диапазон может быть увеличен в пять раз до 1,5–9,0 мг / мл. Если длину пути уменьшить в 100–0,01 см, то измеряемый диапазон будет от 30 до 180 мг / мл. Таким образом, стандартный спектрофотометр можно использовать с имеющимися в продаже кюветами с более коротким пробегом для измерения более высоких концентраций белка без разбавления.Также доступны спектрофотометры и аксессуары для спектрофотометров (например, оптоволоконные зонды), предназначенные для измерения высоких концентраций белка и основанные на том же принципе уменьшения длины пути.

Биофармацевтическая промышленность производит рекомбинантные белки с различными уровнями концентрации белка для терапевтического применения. Используя ранее описанную концепцию BSA, например, на очищенных рекомбинантных белках суперсемейства трансформирующего фактора роста бета с абсорбционной способностью 1.36 мл мг -1 см -1 или моноклонального антитела (mAb) с аналогичной абсорбционной способностью, диапазон измерения составляет приблизительно от 0,15 до 0,9 мг / мл с ячейкой с длиной пути 1 см. Однако, если длина пути кюветы уменьшается в десять раз до 0,1 см, диапазон концентрации белка изменяется примерно до 1,5–9 мг / мл. Для кюветы с длиной пути в 100 раз короче, 0,01 см, диапазон концентраций белка составляет примерно от 15 до 90 мг / мл.

Следовательно, согласно результатам расчетов, приведенным в таблице Table I , можно измерить широкий диапазон концентраций белка без выполнения какого-либо разбавления образцов.Концентрации белка для биофармацевтических лекарственных веществ и лекарственных препаратов могут быть определены непосредственно без предварительного разбавления путем выбора подходящей длины пути поглощения кюветы в соответствии с поглощающей способностью белка и ожидаемой концентрацией.

Таблица I: Диапазоны измерения концентраций в зависимости от длины пути кюветы.

Поглощение при 280 нм

Длина пути кюветы

1,0 см

0.2 см

0,1 см

0,02 см

0,01 см

Бычий сывороточный альбумин (BSA) с абсорбционной способностью 0,667 мл мг-1 см-1

1,2

1.80

17.99

89.96

179.91

1.0

1.50

7.50

14.99

74.96

149.93

0.7

1.05

.

.49

52,47

104,95

0,5

0,75

3,75

7,50

37,48

74,96

0,3

74,96

0,3

0,45

2,25

0,45

2,25

1,50

3,00

14,99

29,99

Белок с абсорбционной способностью 1,36 мл мг-1 см-1

1,2

0,88

4,41

8.82

44,12

88,24

1,0

0,74

3,68

7,35

36,76

73,53

0,7

0,51

2,57

0004 0,51

2,57

0004 5,1

1,84

3,68

18,38

36,76

0,3

0,22

1,10

2,21

11,03

22,06

0,2

0.15

0,74

1,47

7,35

14,71

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
УФ-поглощение белковых растворов измерялось при 280 и 320 нм с использованием спектрофотометра Agilent 8453 UV / VIS с различной длиной пути поглощения кварца 1 см клетки. Кварцевые кюветы с длиной оптического пути 0,01, 0,1 и 0,2 см от Agilent использовались для измерений высокой концентрации белка. Допуски размеров составляли ± 0,001 см (0,1%) для ячейки с длиной пути 1 см, 0.001 см (1%) для ячейки 0,1 см, 0,001 см (0,5%) для ячейки 0,2 см и 0,0005 см (5%) для ячейки 0,01 см (2). Для сравнения: допустимая систематическая плюс случайная ошибка для механических дозаторов составляет 1,4% для 10 мкл, 1,0% для 100 мкл и 0,8% для 1000 мкл. Кроме того, вязкость раствора, качество прилегания используемых наконечников и техника оператора могут привести к ошибке. Таким образом, ошибка разбавления, вносимая одним разбавлением, может быть больше, чем ошибка размера для всех кювет, кроме самой короткой длины пути (0.01 см), а для многократных разведений погрешность возрастает.

NanoDrop 8000 (Thermo Fisher Scientific), спектрофотометр с фиксированным световым путем 0,1 и 0,02 см, для которого не требуется кювета, также использовался для сравнения. Каждый образец измеряли в трех экземплярах. Оценка повторяемости измерений используется для того, чтобы убедиться в отсутствии проблем с переносом пробы или чистотой поверхности.

Для реализации использования ячеек с коротким ходом на рутинной основе, все операции, такие как заполнение кюветы, обеспечение адекватной промывки между образцами, а также очистка и сушка кюветы, должны быть регламентированы специальными инструкциями и утверждены, чтобы гарантировать, что процедура надежен с несколькими аналитиками.

РЕЗУЛЬТАТЫ
Точность и прецизионность определения концентрации белка с использованием клеток с меньшей длиной пути без разбавления образца оценивали с использованием BSA, mAb и трансформирующего фактора роста бета. В исследовании использовались концентрации BSA приблизительно 10 мг / мл и 70 мг / мл. Очищенные рекомбинантные белки суперсемейства трансформирующего фактора роста бета и белки mAb, использованные в исследованиях, имели абсорбционную способность 1,36 мл мг-1 см-1 и 1,38 мл мг-1 см-1. Исследуемые концентрации составляли 6, 8, 20 и 60 мг / мл.Результаты представлены в следующих разделах.

Концентрация белка 6,0 мг / мл. Точность процедуры определения концентрации белка в высококонцентрированных образцах белка с использованием кюветы с более коротким длиной пути была проверена с использованием рекомбинантного белка при концентрации около 6 мг / мл с поглощающей способностью 1,36 мл мг-1 см-1. Концентрация была измерена непосредственно (без разбавления) с использованием кюветы 0,1 см, и результаты показаны в Таблица I I. Результат 6.5 мг / мл отлично согласуется (99% от значения) с результатом 6,6 мг / мл, полученным с использованием кюветы диаметром 1 см с помощью валидированного метода для конкретного продукта с использованием нескольких разведений при различных концентрациях. Данные, представленные в Таблице II , также указывают на то, что точность этого метода с использованием кюветы 0,1 см очень хорошая, всего около 0,1% RSD (относительное стандартное отклонение) для шести измерений.

Таблица II: Результаты концентрации белка для очищенного белка 6 мг / мл с 0.Кювета с длиной оптического пути 1 см (поглощающая способность 1,36 мл · мг-1 · см-1) по сравнению с принятым значением, полученным с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см.

Образец 6 мг / мл 1

Поглощение 280 нм 0,1 см

Поглощение 2 320 нм 0,1 см

Концентрирование с использованием кюветы 0,1 см (мг / мл)

Принято 3 Концентрация с использованием кюветы 1 см (мг / мл)

Точность 4

6 мг / мл_a

0.

0,01880

6,525

6,751

6 мг / мл_b

0,

0,01765

6,531

6,623

6,531

6,623

6 мг / мл_д

0,

0,01754

6,527

6,519

6 мг / мл_e

0,

0,01804 6 .0005

0,01804

531

6,456

6 мг / мл_f

0,

0,01778

6,537

N / A5

в среднем

6,530

9000 стандартное отклонение

9000 0,112

% относительное стандартное отклонение

0,1

1,7

1 Было проведено шесть независимых измерений однородного образца. Кювету вынимали из держателя, опорожняли, промывали и затем заполняли образцом для каждого измерения.
2 Было вычтено 320 значений. 3 Принятое значение было получено с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см и пяти различных разведений в диапазоне оптической плотности спектрофотометра.
4 % точность = (наблюдаемая / принятая) x 100. 5 Только пять повторов, состоящих из различных разведений, были выполнены для измерений в кювете с длиной пути 1 см.

Концентрация белка 20 мг / мл. Затем было проведено исследование с использованием 0.Кювета с длиной оптического пути 01 см для белка с поглощающей способностью 1,38 мл · мг-1 · см-1. Исходя из длины пути кюветы и абсорбционной способности, ожидаемый диапазон измеряемой концентрации белка составляет приблизительно от 15 до 90 мг / мл. В этом исследовании рекомбинантный белок с концентрацией приблизительно 20 мг / мл анализировали с помощью кюветы с длиной оптического пути 0,01 см в спектрофотометре Agilent 8453 UV / Vis. Были использованы образцы из шести партий, нацеленных на одинаковую концентрацию примерно 20 мг / мл, и каждую партию анализировали в трех экземплярах.Результаты значений оптической плотности и концентраций белка, измеренных с помощью кюветы с длиной оптического пути 0,01 см, показаны в Таблице III . Концентрации белка в образцах с концентрацией 20 мг / мл, определенные с помощью кюветы диаметром 1 см с помощью специального валидированного метода для этого продукта, также показаны в Таблице III . Это значение (т. Е. Принятое значение) использовалось для расчета точности по сравнению со значением, полученным из кюветы с длиной оптического пути 0,01 см.

Таблица III: Результаты концентрации белка для очищенного белка 20 мг / мл с 0.Кювета
с длиной оптического пути 01 см (поглощающая способность 1,38 мл · мг-1 · см-1) по сравнению с принятым значением, полученным с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см.

Образец 1

Поглощение 280 нм 0,01 см

Поглощение 320 нм 0,01 см

Концентрация 2 (мг / мл) для 0,01 см

Среднее, стандартное отклонение ,% RSD 3

Принято 4 концентрация через 1 см (мг / мл)

Точность 5

1a

0.28071

0,00161

20,224

20,084
0,2386
1,2

19,0

106%

1b

0,27434

-0,00469

20.2194000

0009

0003

0009

0009

0,28773

0,00182

20,718

20,979
0,2387
1,1

20,3

103%

2b

0,28621

-0.00406

21.034

2c

0.29580

0.00344

21.186

3a

0.28483

-0.00120

20.727

20.7000

20.727

20.7000

20.727

20.7000

20.727

20.7000

0

0,00321

20.808

3c

0,29054

0,00387

20,773

4a

0,28894

-0,00098

21.009

21,030
0,0191
0,1

19,7

107%

4b

0,28991

-0,00041

21,038

4c

0,29056

000

0005

0005

0004

0,29056

0004

20,736

20,780
0,0653
0,3

20,0

104%

5b

0,29164

0,00384

20,855

5c

0.29078

0.00445

20.749

6a

0.29180

0.00576

20.727

20.994
0.4054
1.9

20.0

105000

000

000

000

000

000

000

0005

000

0005 0,29302

0,00607

20,793

1 Для каждого образца были выполнены три независимых измерения. Например, 1a, 1b и 1c - это три измерения для Образца 1. 2 значения A320 были вычтены. 3 RSD - относительное стандартное отклонение.
4 Принятое значение было ранее получено с использованием проверенного метода для конкретного продукта для ячейки с длиной пути 1 см. 5 Точность = (наблюдаемая / принятая) x 100.

На основании этих результатов значения концентрации белка, полученные для шести партий с использованием ячейки с длиной пути 0,01 см без какого-либо разбавления образца, находятся в пределах от 3 до 7% от принятого значения. . Значение RSD для большинства измерений было немного больше 1% или меньше, что указывает на высокую точность метода.1% RSD меньше ожидаемого для нескольких объемных разведений, которое может достигать 5% в зависимости от концентрации белка. Например, множественные разведения для данных 6 мг / мл в Таблице III с помощью объемных разведений имели RSD 1,7. Точность для принятого значения, для которого разбавления проводились гравиметрически, а не объемно (данные о прецизионности не показаны), составляла до 1% и сравнима с результатами с длиной оптического пути 0,01 см. Результаты имеют небольшое положительное смещение по сравнению с результатами кюветы размером 1 см, но смещение соответствует положительной стороне и не распределяется случайным образом.

Концентрация белка 60 мг / мл. Подобно образцу белка с концентрацией 20 мг / мл, образец белка с концентрацией 60 мг / мл был оценен с использованием кюветы размером 0,01 см, поскольку диапазон этой кюветы, по прогнозам, составляет до 90 мг / мл. Результаты, полученные для образцов белка 60 мг / мл из шести партий, представлены в Таблице IV . Допустимое значение для этих партий с помощью утвержденного метода для конкретного продукта также показано в таблице. На основе этих результатов значения концентрации белка, полученные для шести партий с использованием 0.Длина пути ячейки 01 см без разбавления пробы находится в пределах от 3 до 7% от принятого значения. Кроме того, значение RSD для повторов составляет менее 1%, что указывает на хорошую точность метода, аналогичную данным, приведенным в предыдущих исследованиях. Результаты, полученные в этом исследовании, также имеют небольшое положительное смещение по сравнению с результатами кюветы размером 1 см, аналогично результатам 20 мг / мл.

Таблица IV: Результаты концентрации белка для очищенного белка 60 мг / мл с кюветой
с длиной оптического пути 0,01 см (поглощающая способность 1.38 мл мг-1 см-1) по сравнению с принятым значением, полученным с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см.

Образец 1

Поглощение 280 нм 0,01 см

Поглощение 320 нм 0,01 см

Концентрация мг / мл 2 для 0,01 см

Среднее отклонение, стандартное отклонение 21,

Принято 4 концентрация с использованием 1 см (мг / мл)

% Точность 5

1a

0.84307

0.00344

60.843

60.818
0.1166
0.2

57.4

106%

1b

0.83702

-0.00126

000

000

000

000

000

000

000

000

000 2

0,69401

-0,00053

50,291

49,951
0,3783
0,8

46,7

107%

2b

0,69028

-0,00121

50.020

2c

0.68370

-0.00033

49.543

3a

0.77884

0.00080

56.380

56.623
0.2632

56.623
0.2632

56.623
0.2632

56,588

3c

0,79184

0,00658

56,903

4a

0,79391

-0,00053

57,530

57,853
0.5023
0,9

53,9

107%

4b

0,79485

-0,00104

57,598

4c

0,80708

0,00072

000

0005000

0005

00050005

00050005

000

0005 57,036
0,4979
0,9

53,1

107%

5b

0,78018

-0,00190

56,535

5c

0,79392

-00004 9.530

6a

0,79559

-0,00712

57,651

57,905
0,2484
0,4

56,1

103%

6b

0,80244

000

0,80244

000

0,80244

000

0,80244

000

0,80244

000

0,80244

000 0,00400

57,917

1 Для каждого образца было выполнено три независимых измерения. Например, 1a, 1b и 1c - это три измерения для образца 1. 2 значения A320 были вычтены. 3 RSD - относительное стандартное отклонение.
4 Принятое значение было ранее получено с использованием проверенного метода для конкретного продукта для ячейки с длиной пути 1 см. 5 Точность = (наблюдаемая / принятая) x 100.

Концентрация белка 70 мг / мл. Точность процедуры определения концентрации белка в образцах с высоким содержанием белка с использованием клеток с меньшей длиной пути без разбавления образца также проверялась с использованием BSA. Две партии образцов BSA с концентрацией приблизительно 70 мг / мл были получены из Национального института стандартов и технологий (NIST) (партия № SRM 927c и SRM 927d) и проанализированы с использованием кюветы с длиной оптического пути 0.01 см. Официальные концентрации белка в образцах NIST BSA составляют 72,112 мг / мл и 71,57, оба ± 0,74 мг / мл, соответственно. Каждую партию анализировали в трех экземплярах, и результаты представлены в Таблице V .

Таблица V: Результаты концентрации белка для бычьего сывороточного альбумина (БСА) (7% или 70 мг / мл) с кюветой с длиной пути 0,01 см (поглощающая способность 0,667 мл мг-1 см-1) по сравнению с принятыми значение. RSD - относительное стандартное отклонение.

Образец 1

Поглощение 280 нм0.01 см

Поглощение 320 нм 0,01 см

Концентрация мг / мл 2 для 0,01 см

Среднее значение, стандартное отклонение,% RSD 3

Принято 4 концентрация мг / мл

% Погрешность 5

927c _a

0,48508

0,00404

72,119

72,112
0,033
0,0

71,57
± 0,74

0004

48403

0,00328

72,077

927c _c

0,48518

0,00400

72,141

927d _a

0,48333

0,00786 9000.30005

52

0,00786 9000.30005

52

927d _b

0,48075

0,00541

71,266

927d _c

0,48250

0,00629

71,396

1 SR Образцы материалов стандартов BSA и NIST являются национальными стандартами стандартов BSA и являются образцами стандартов BSA и являются национальными стандартами стандартов BSA и являются«927» - это обозначение 7% BSA, а «c» и «d» относятся к конкретным партиям. Обе партии были измерены в трех экземплярах. Название образца 927c_ a - первое измерение для лота 927c. 2 значения A320 были вычтены. 3 RSD - относительное стандартное отклонение.
4 Принятое значение - это «сертифицированное» значение NIST для SRM 927c и «эталонное» значение для 927d. Эталонное значение 927d используется для согласования со значениями, исторически сообщаемыми NIST в соответствии с сертификатом анализа NIST для этих материалов. 5 % Точность = (наблюдаемая / принятая) x 100.

% точности в концентрации белка, рассчитанной для значений кюветы 0,01 см из официальных значений белка NIST, составляет 101% и 102%, соответственно, что указывает на то, что результаты для Методика неразбавленной пробы с использованием кюветы 0,01 см существенно не отличается от фактического значения. Точность метода с этими образцами также хорошая со значением RSD менее 1%, что указывает на то, что даже одного измерения достаточно с использованием 0.Процедура с кюветой 01 см.

СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ
NanoDrop 8000 - один из серии приборов, которые можно использовать для измерения концентрации белка без разбавления образца. В этом приборе небольшой объем образца (1 или 2 мкл) наносится на подставку на оптическом пути, и поверхностное натяжение раствора используется для образования столбца между двумя оптическими поверхностями. Следовательно, ячейка для образца не требуется. NanoDrop 8000 имеет две доступные длины пути: 0.1 см и 0,02 см, и автоматически переключается между двумя длинами в зависимости от концентрации раствора (доступны другие модели с другой длиной пути). Для белка с абсорбционной способностью 1,38 мл · мг-1 · см-1 измеряемый диапазон Концентрация белка составляет приблизительно от 9 мг / мл до 45 мг / мл. Образцы с двумя концентрациями белка, 10 мг / мл БСА и 20 мг / мл очищенного рекомбинантного белка, использовали для сравнения значений концентрации белка, полученных на спектрофотометре, с 0.Кюветы с длиной пути 01 и 0,1 см и значения концентрации белка, полученные с помощью NanoDrop 8000. Результаты показаны в Таблице VI для результатов BSA 10 мг / мл для обоих методов неразбавленного образца с длиной пути 0,1 см. кювета и метод NanoDrop 8000. Результаты, полученные для NanoDrop 8000, показаны в Таблице VI I, а соответствующие результаты для кюветы с длиной оптического пути 0,01 см показаны в Таблице III . Данные также показаны рядом в Таблице VIII.

Таблица VI: Результаты концентрации белка для бычьего сывороточного альбумина (BSA) 10 мг / мл с использованием кюветы с длиной оптического пути 0,1 см (поглощающая способность 0,667 мг -1 см -1 ) и NanoDrop 8000 по сравнению с принятое значение с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см.

10 мг / мл BSA 1

Поглощение 280 нм 0,1 см кювета

Поглощение 320 нм 0,1 см кювета

Концентрация мг / мл 2 0.Кювета 1 см

Концентрация мг / мл 2 byNanoDrop

Допустимая концентрация мг / мл для кювет 1 см 3

1a

0,6

0,004130

0,004130

0,6

0,004036

10,315

9,865

10,445

1c

0,693060

0,004729

10,320

9.+970

10,492

1d

0,6

0,004344

10,316

10,120

10,569

1e

0,6

0,004191

10,326

10000

10,492

1f

0,693360

0,004887

10,322

9,955

10,473

в среднем

10,319

9,950

10,465

стандартное отклонение

0.004

0,114

0,082

% относительное стандартное отклонение

0,0

1,1

0,788

% Точность 4

99%

14 95%

1 Для кюветы с длиной оптического пути 0,1 см было выполнено шесть независимых измерений однородного образца. 2 значения A320 были вычтены. 3 Принятое значение было получено с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см и шести различных разведений в диапазоне оптической плотности спектрофотометра. 4 % Точность = (наблюдаемая / принятая) x 100. 5 Точность для двух других методов рассчитывается относительно принятого значения.

Когда средние концентрации белка в образцах BSA 10 мг / мл сравнивались со средним принятым значением, наблюдалась точность 99% и 95% для кюветы с длиной оптического пути 0,1 см и NanoDrop 8000, соответственно ( Таблица VI ). Хотя данные, полученные методом NanoDrop 8000, статистически различаются (p <0.0005 по t-критерию Стьюдента, а также с неравными дисперсиями по критерию Велча) процентное различие в среднем значении концентрации белка составляет менее 5% от процедуры измерения длины пути 0,1 см, а также от теоретических (принятых) значений. Влияние этой разницы необходимо будет оценить до внедрения метода в производственной среде или в аналитической лаборатории контроля качества; в противном случае расхождения между различными этапами процесса или разными лабораториями могут привести к результатам, выходящим за пределы спецификации.Кроме того, первопричину систематической ошибки необходимо изучить, понять и либо устранить, либо учесть, чтобы получить надежный метод, который был бы точным и воспроизводимым при использовании в нескольких лабораториях. Возможные источники различий между методами разбавления и методами короткого пути представлены ниже.

Когда концентрации белка в образцах очищенного белка 20 мг / мл сравнивались с принятыми значениями, наблюдалась точность от 103% до 107% для 0.Кювета с длиной оптического пути 01 см (, таблица III, ) и точность от 95% до 100% наблюдались для NanoDrop 8000 (, таблица VII, ). Данные показаны рядом в Таблице VIII для прямого сравнения. Значение концентрации белка, полученное методом NanoDrop 8000, также статистически отличается по сравнению с методом кюветы с длиной оптического пути 0,1 см. Как отмечалось ранее, необходимо понять причину разницы в концентрации белка и устранить ее, чтобы получить надежный метод для намеченной цели для производственных приложений или лабораторий контроля качества.Интересно отметить, что для кюветы размером 0,01 см с образцом 60 мг / мл точность по сравнению с принятым методом была такой же, как и для образцов с концентрацией 20 мг / мл.

Таблица VII: Результаты концентрации белка для очищенного белка 20 мг / мл, полученные с помощью NanoDrop 8000
(поглощающая способность 1,38 мл мг -1 см -1 ) по сравнению с принятым значением с использованием пути длиной 1 см длина кюветы.

Образец 1

Поглощение 2 280 нм

Поглощение 3 320 нм

Концентрация мг / мл

Среднее значение, стандартное отклонение% RSD 4

Принятая концентрация мг / мл на 1 см 5

% Точность 6

1a

2.633

0,017

18,957

18,998
0,0906
0,5

19,0

100%

1b

2.609

-0,004

18.9354000

000

000

000

18.9354000

000

000

000

000

000

2,616

-0,090

19,609

19,476
0,1341
0,7

20,3

96%

2b

2,671

0,002

0,002

714

0,026

19,478

3a

2,666

0,021

19,167

19,070
0,0840
0,4

20,0

95%

000

000

000

000

000

000

000

000

000 3 2,653

0,029

19,014

4a

2,714

0,051

19,297

19,319
0,0261
0,1

19,7

98%

4b679

0.009

19.348

4c

2.704

0,039

19.312

5a

2.673

0,051

19.000

54

0,051

19.000

54

000

19.000

54 1995000 909

19.000

54 2,649

0,032

18,964

5c

2,666

0,024

19,145

6a

2,653

0,031

19,000

18.942
0,0664
0,4

20,0

95%

6b

2,649

0,033

18,957

6c

2,649

Три измерения

0,045

    0 были выполнены для каждого независимого образца с использованием каждого образца 900 NanoDrop 8000. Например, 1a, 1b и 1c - это три измерения для Образца 1.
    2 Приведенные значения поглощения нормированы на длину пути 0,1 см. Все значения 3 A320 были вычтены. 4 RSD - относительное стандартное отклонение.
    5 Принятое значение было ранее получено с использованием проверенного метода для конкретного продукта для ячейки с длиной пути 1 см. 6 Точность = (наблюдаемая / принятая) x 100.

    Таблица VIII: Сравнение результатов концентрации белка, полученных с ячейкой с длиной пути 0,01 см и
    с NanoDrop 8000 для очищенного белка 20 мг / мл (поглощающая способность 1,38 мл мг -1 см -1 ).

    Образец1

    0.01 см длина пути мг / мл

    0,01 см средняя длина пути мг / мл

    0,01 см длина пути SD% RSD

    NanoDrop мг / мл

    NanoDropaverage

5 9000 NanoDropSD% RSD

1

20,224

20,084

0,2386
1,2

18,957

18,998

0,0906
0,5

20,219

5

18,99809

19.101

2

20.718

20.979

0.2387
1.1

19.609

19.476

0.1341
0.7

21.034

000

000

21.034

65000

000

21.034

000

000

0,0410
0,2

19,167

19,070

0,0840
0,4

20.808

19,029

20,773

19,014

4

21.009

21.030

0.0191
0.1

19.297

19.319

0,0261
0,1

21.038

19.348

21.044

19.312

000

000

000

000

000

19,036

0,0959
0,5

20,855

18,964

20,749

19,145

6

20,727

20,994

0.4054
1,9

19,000

18,942

0,0664
0,4

21,460

18,957

20,793

18,870

1 Для каждого метода было выполнено шесть независимых измерений.

Наблюдается разница в результатах концентрации белка до 7% между короткими длинами пути и методом пяти разведений с использованием кювет диаметром 1 см. Потенциальные источники ошибок могут быть связаны с обоими методами, и они включают допуски на размер ячеек с кратчайшей длиной пути, потерю белка из-за адсорбции на стенках пробирки во время последовательных разбавлений, влияние вязкости на пипетирование образцов и допуски пипеток.Применение ортогонального метода, такого как аминокислотный анализ, может предоставить дополнительную информацию относительно истинного значения концентрации белка, и это может уменьшить очевидную изменчивость измеренной концентрации белка. Кроме того, оценка кювет от разных производителей на меньшие допуски на размер в длине оптического пути может уменьшить некоторую погрешность. Подводя итог, можно сделать вывод, что приемлемые результаты могут быть получены с использованием кювет размером 0,01, 0,1 и 0,2 см со стандартным спектрофотометром.Также доступны более короткие пути, и их можно оценить.

ОБСУЖДЕНИЕ
Данные, представленные в этом исследовании, демонстрируют, что можно измерить широкий диапазон концентраций белка без разбавления образцов с использованием стандартного спектрофотометрического оборудования, которое уже доступно и подходит для использования в большинстве аналитических лабораторий биофармацевтических препаратов. Это дает значительное преимущество перед внедрением новой технологии с точки зрения времени и ресурсов.Альтернатива разведениям для измерения концентрации белка легко доступна для большинства лабораторий путем покупки новых принадлежностей, кювет с более коротким оптическим путем и разработки рабочих параметров для интересующего белка.

Как отмечалось в описанных экспериментах, операции, связанные с обработкой белковых растворов и измерением оптической плотности, должны быть специфическими. Например, чрезмерное встряхивание или энергичное пипетирование раствора может вызвать агрегацию. Это может привести к высокому фону при 320 нм, что приведет к ошибочно низким значениям концентрации.Следовательно, верхние пределы допустимого фона должны быть указаны в рабочей процедуре и должны быть конкретными для каждой кюветы с длиной оптического пути, используемой в анализе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Данные были представлены, чтобы продемонстрировать, что измерения концентрации белка методом A280 с использованием коммерчески доступных кювет с коротким оптическим путем является жизнеспособной альтернативой традиционно широко используемым кюветам с длиной оптического пути 1 см для определения более высоких концентраций белка.Там, где это применимо, следует оценить сопоставимость с существующими методами, а также понять причину любых различий и устранить их, чтобы гарантировать надежность метода. Использование кювет с меньшей длиной оптического пути может дать значительное преимущество, поскольку устраняет необходимость в многократных разбавлениях проб и сокращает время подготовки проб и анализа. Кроме того, реализация метода не требует аттестации нового оборудования, учитывая, что спектрофотометры UV / VIS уже используются в большинстве лабораторий.Подходящую длину пути кюветы для данного применения необходимо будет выбрать на основе концентрации и абсорбционной способности целевого белка.

БЛАГОДАРНОСТЬ
Авторы хотели бы поблагодарить Denny Maratea, Quality Science and Technology, Pfizer, Andover за комментарии к этой статье.

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
1. A. Aitken and M.P. Лермонт, «Определение белка по поглощению УФ-излучения», в The Protein Protocols Handbook , J.М. Уокер, Эд. (Humana Press, часть Springer Science + Business Media, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, 3-е изд., 2009 г.), стр. 3-6.
2. Agilent Technologies, Принадлежности и расходные материалы для УФ-видимой спектроскопии , номер публикации 5988-5967EN (2005).

Об авторе Лин Уотсон, доктор философии , старший научный сотрудник, [email protected], и Каннаппан Веерарагаван, доктор философии , заместитель директора отдела качества науки и технологий, Pfizer Global Supply, 1 Бертт Роуд, Андовер, Массачусетс 01810 США.

Вестерн-блот подготовка проб | Abcam

Буферы для лизиса различаются по своей способности солюбилизировать белки, при этом буферы, содержащие додецилсульфат натрия (SDS) и другие ионные детергенты, считаются самыми жесткими и, следовательно, с наибольшей вероятностью дают самый высокий выход.

При выборе буфера для лизиса главное внимание уделяется тому, распознает ли выбранное антитело денатурированные образцы. Если это не так, это будет указано в таблице данных антител, и следует использовать буферы без детергента или с относительно мягкими неионными детергентами (NP-40, Triton X-100).

917- плазменный 917- 26 Тритон
Расположение белка Рекомендуемый буфер
Целые клетки NP-40
Цитоплазматический (растворимый) Связанный трис-HCl (цистоплазматический)
Мембранно-связанный NP-40 или RIPA
Ядерный RIPA или используйте протокол ядерной фракции *
Митохондрии RIPA или используйте протокол митохондриальной фракции
77031729 которые обнаруживаются исключительно или преимущественно в субклеточном месте, будут в большей степени обогащены лизатом субклеточной фракции по сравнению с лизатами целых клеток или тканей.Это может быть полезно при попытке получить сигнал для слабо экспрессируемого белка. Пожалуйста, ознакомьтесь с нашими отдельными протоколами субклеточного фракционирования.

Рецепты буфера для лизиса:

буфер NP-40

  • 150 мМ хлорид натрия
  • 1,0% NP-40 (NP-40 может быть заменен Тритоном X-100)
  • 50 мМ Трис pH 8,0

Это популярный буфер для изучения белков, которые являются цитоплазматическими или мембраносвязанными, а также для экстрактов целых клеток.Если есть опасения, что интересующий белок не полностью экстрагируется из нерастворимого материала или агрегатов, буфер RIPA может быть более подходящим, поскольку он содержит ионные детергенты, которые легче переводят белки в раствор.

RIPA-буфер (буфер для анализа радиоиммунопреципитации)

  • 150 мМ хлорид натрия
  • 1,0% NP-40 или Triton X-100
  • 0,5% дезоксихолат натрия *
  • 0,1% SDS (додецилсульфат натрия)
  • мМ Трис, pH 8.0

* Может быть приготовлен как 10% основной раствор, который необходимо защищать от света.

Буфер RIPA применим для экстрактов цельных клеток и мембраносвязанных белков и может быть предпочтительнее буферов, содержащих только NP-40 или Triton X-100, для экстракции ядерных белков. Это нарушит белок-белковые взаимодействия и, следовательно, может быть проблематичным для иммунопреципитации и анализов с понижением уровня.

В случаях, когда важно сохранить белок-белковые взаимодействия или минимизировать денатурацию, следует использовать буфер без ионных детергентов (например, SDS) и в идеале без неионных детергентов (например, Triton X-100).

Лизис клеток с буфером, не содержащим детергентов, достигается механическим сдвигом, часто с помощью гомогенизатора Даунса или пропусканием клеток через наконечник шприца. В этих случаях будет достаточно простого Трис-буфера, но, как отмечалось выше, для высвобождения белков, связанных с мембраной или цитоскелетом, требуются буферы с детергентами.

Трис-HCl буфер

Трис-тритоновый буфер (цитоскелетные белки)

  • 10 мМ Трис, pH 7,4
  • 100 мМ NaCl
  • 1 мМ ЭДТА
  • 1 мМ ЭДТА
  • 1 мМ ТРИТ
  • ЭГ -100
  • 10% глицерин
  • 0.1% SDS
  • 0,5% дезоксихолат

Все четыре из этих буферов будут храниться при 4 ° C в течение нескольких недель или до года, если их разделить на аликвоты и хранить при -20 ° C.



Ингибиторы протеаз и фосфатаз

Как только происходит лизис, начинается протеолиз, дефосфорилирование и денатурация. Эти события можно значительно замедлить, если образцы постоянно держать на льду или при температуре 4 ° C, а соответствующие ингибиторы добавляются свежими в буфер для лизиса.

Доступны готовые коктейли из ингибиторов от разных поставщиков, но вы можете приготовить коктейль самостоятельно.

Ингибитор Ингибитор протеазы /
фосфатазы
Ингибирование
Конечная концентрация в буфере для лизиса Исходное (хранить при -20 ° C)
Апротининin трипсин, плазмотин25 2 мкг / мл Разбавить водой, 10 мг / мл. Не используйте повторно размороженные аликвоты.
Леупептин Лизосомальный 5–10 мкг / мл Разбавить водой.Не используйте повторно размороженные аликвоты.
Пепстатин А Аспарагиновые протеазы 1 мкг / мл Развести в метаноле, 1 мМ.
PMSF Серин, цистеиновые протеазы 1 мМ Развести в этаноле. Вы можете повторно использовать ту же аликвоту.
ЭДТА Металлопротеиназы, требующие Mg 2+ и Mn 2+ 5 мМ Разбавленный в dH 2 0, 0,5 М.Отрегулируйте pH до 8,0.
EGTA Металлопротеиназы, требующие Ca 2+ 1 мМ Разбавить в dH 2 0, 0,5 М. Довести pH до 8,0
Фторид натрия / треон Серин Фосфин 5–10 мМ Разбавить водой. Не используйте повторно после разморозки.
Натрия
ортованадат
Тирозинфосфатазы 1 мМ Разбавить водой.Не используйте повторно после разморозки.


Приготовление ортованадата натрия

Выполните все шаги в вытяжном шкафу.

  1. Приготовьте 100 мМ раствор в бидистиллированной воде.
  2. Установите pH на 9,0 с помощью HCl.
  3. Варить до бесцветного состояния. Сведите к минимуму изменение объема из-за испарения за счет неплотного покрытия.
  4. Охладите до комнатной температуры.
  5. Снова установите pH на 9,0.
  6. Варить до бесцветного состояния.
  7. Повторяйте этот цикл, пока pH раствора не останется 9.0 после кипячения и охлаждения.
  8. Довести водой до первоначального объема.
  9. Хранить аликвотами при -20 ° C. Отменить, если образцы пожелтели.


Приготовление лизата из культуры клеток
  1. Поместите чашку для культивирования клеток на лед и промойте клетки ледяным PBS.
  2. Аспирируйте PBS, затем добавьте ледяной буфер для лизиса (1 мл на 10 7 клеток / 100-миллиметровую чашку / 150 см 2 колбу ; 0,5 мл на 5x10 6 клеток / 60-миллиметровую чашку / 75 см 2 колбы ).
  3. Соскребите прилипшие клетки с чашки с помощью холодного пластикового скребка для клеток, затем осторожно перенесите суспензию клеток в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку. В качестве альтернативы клетки можно трипсинизировать и промывать PBS перед ресуспендированием в буфере для лизиса в пробирке для микроцентрифуги.
  4. Поддерживайте постоянное перемешивание в течение 30 минут при 4 ° C.
  5. Центрифуга в микроцентрифуге при 4 ° C. Возможно, вам придется изменить силу и время центрифугирования в зависимости от типа клеток; Ориентировочное значение - 20 минут при 12000 об / мин, но это должно быть определено для вашего эксперимента (например,грамм. лейкоциты нуждаются в очень легком центрифугировании).
  6. Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду, и выбросьте осадок.


Приготовление лизата из тканей
  1. Рассеките интересующую ткань чистыми инструментами, предпочтительно на льду, и как можно быстрее, чтобы предотвратить разложение протеазами.
  2. Поместите ткань в круглодонные микроцентрифужные пробирки или пробирки Эппендорфа и погрузите в жидкий азот, чтобы быстро заморозить.Храните образцы при -80 ° C для дальнейшего использования или на льду для немедленной гомогенизации.
  3. Для кусочка ткани ~ 5 мг быстро добавьте ~ 300 мкл ледяного буфера для лизиса в пробирку, гомогенизируйте с помощью электрического гомогенизатора, дважды промойте лезвие еще 2 х 300 мкл буфера для лизиса, затем поддерживайте постоянное перемешивание в течение 2 ч при 4 ° C (например, поместите на орбитальный шейкер в холодильник). Объемы буфера для лизиса должны определяться в зависимости от количества присутствующей ткани. Белковый экстракт не следует слишком разбавлять, чтобы избежать потери белка и больших объемов образцов, которые необходимо загрузить в гели.Минимальная рекомендуемая концентрация - 0,1 мг / мл, оптимальная - 1–5 мг / мл).
  4. Центрифуга в течение 20 минут при 12000 об / мин при 4 ° C в микроцентрифуге. Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку на льду. Выбросьте гранулы.


Определение концентрации белка
  1. Выполните анализ Брэдфорда, анализ Лоури или анализ бицинхониновой кислоты (BCA). Бычий сывороточный альбумин (БСА) - часто используемый стандарт белка.
  2. После того, как вы определили концентрацию каждого образца, вы можете заморозить его при -20 ° C или -80 ° C для дальнейшего использования или подготовки к иммунопреципитации или для нанесения на гель.


Подготовка образцов для загрузки в гели


Денатурированные, восстановленные образцы

Антитела обычно распознают небольшую часть интересующего белка (называемого эпитопом), и этот домен может находиться в трехмерной конформации белка.Чтобы обеспечить доступ антитела к этой части, необходимо развернуть белок, т.е. денатурировать его.

Для денатурирования используйте загрузочный буфер с анионным детергентом додецилсульфатом натрия (SDS) и кипятите смесь при 95–100 ° C в течение 5 минут. Нагревание при 70 ° C в течение 5–10 мин также допустимо и может быть предпочтительным при изучении многопроходных мембранных белков. Они имеют тенденцию к агрегированию при кипячении, и агрегаты могут не входить в гель эффективно.

Стандартный буфер загрузки называется 2X буфером Лэммли (Laemmli UK, 1970.Расщепление структурных белков при сборке головки батериофага Т4. Природа, 227, 680–5). Он также может быть изготовлен с концентрацией 4X и 6X, чтобы минимизировать разбавление образцов. 2X следует смешать с образцом в соотношении 1: 1.


Рецепт 2x буфера Лэммли

  • 4% SDS
  • 10% 2-меркаптоэтанол
  • 20% глицерин
  • 0,004% бромфеноловый синий
  • 0,125 M Tris HCl
  • Проверить значение pH и довести его до pH 6,8

Когда SDS используется с белками, все белки становятся отрицательно заряженными из-за их присоединения к анионам SDS.SDS связывается с белками довольно специфично в массовом соотношении 1,4: 1. При этом SDS наделяет полипептид отрицательным зарядом пропорционально его длине. Денатурированные полипептиды становятся стержнями отрицательного заряда с равными плотностями заряда на единицу длины. Следовательно, миграция определяется молекулярной массой, а не внутренним зарядом полипептида.

Уровень

SDS важен для высококачественного разделения белков: окрашенный белком фон вдоль отдельных участков геля с нечеткими или слегка различимыми полосами белка указывает на старый или некачественный SDS.Включение в буфер 2-меркаптоэтанола или дитиотреитола снижает дисульфидные мостики, что необходимо для разделения по размеру.

Глицерин добавляется в буфер для загрузки, чтобы увеличить плотность загружаемого образца и, следовательно, удерживать образец на дне лунки, ограничивая переполнение и неравномерную загрузку геля.

Для визуализации миграции белков обычно включают в загрузочный буфер небольшую молекулу анионного красителя (например, бромфенолового синего). Поскольку краситель является анионным и небольшим, он будет мигрировать быстрее всех компонентов смеси, подлежащей разделению, и обеспечивает фронт миграции для отслеживания процесса разделения.

Во время обработки образца белка образец следует перемешать встряхиванием до и после стадии нагревания для лучшего разрешения.

Нативные и невосстановленные образцы

Альтернативно, антитело может распознавать эпитоп, состоящий из несмежных аминокислот. Хотя аминокислоты эпитопа отделены друг от друга в первичной последовательности, они близки друг к другу в сложенной трехмерной структуре белка, и антитело будет распознавать эпитоп только в том виде, в котором он существует на поверхности складчатая конструкция.

В этих обстоятельствах важно проводить вестерн-блоттинг в неденатурирующих условиях, и это будет указано в таблице данных в разделе приложений. В общем, неденатурирующие условия просто означают исключение SDS из буферов для образцов и миграции и без нагревания образцов.

Некоторые антитела распознают белок только в его невосстановленной форме (особенно по остаткам цистеина), и восстанавливающие агенты β-меркаптоэтанол и DTT должны быть исключены из загрузочного буфера и буфера для миграции.

Состояние белка Состояние геля Загрузочный буфер Миграционный буфер
Восстановленный, денатурированный Восстановленный и денатурирующий С 2-меркаптоэтанолом или восстановленным DTT 917 917 917 917 917 917 SDS , нативный Восстановительный и нативный С 2-меркаптоэтанолом или DTT и SDS Без SDS
Окисленный, денатурированный Невосстанавливающий и денатурирующий Нет 2-меркаптоэтанол или DTT 917 с SDT 917 с SDS 917
Окисленный, природный Невосстанавливающий и природный Без 2-меркаптоэтанола или DTT, с SDS Без SDS

Практическое правило: уменьшайте и денатурируйте, если в таблице данных не указано иное.

Протоколы предоставляются Abcam «КАК ЕСТЬ» на основе экспериментов в лабораториях Abcam с использованием реагентов и продуктов Abcam; ваши результаты при использовании протоколов, выходящих за рамки этих условий, могут отличаться.

Ключ к смешиванию и разбавлению протеиновых порошков и добавок, и когда их принимать?

Многие люди, покупающие добавки, иногда не уверены, когда и как их принимать. Наиболее частые вопросы, которые я слышу, - это «когда мне взять их?», «Могу ли я добавить к ним еще воды?» И «сколько мне взять?»

На этикетке большинства добавок есть основные инструкции или рекомендации, в которых указано, как их использовать и принимать, хотя этих указаний не всегда бывает достаточно.Для таких продуктов, как жиросжигатели, предтренировочные средства, креатин и усилители энергии, почти всегда лучше следовать инструкциям, которые написаны на этикетке, поскольку они довольно просты.

В большинстве случаев вам необходимо принять определенное количество порошка или таблеток за некоторое время до тренировки. Если вы новичок в добавках, также может быть хорошей идеей начать с половины указанной дозировки (иногда это рекомендуется на этикетке добавки), просто чтобы посмотреть, как ваше тело на нее отреагирует.Некоторые люди более чувствительны к стимуляторам, чем другие, поэтому, приняв половину дозы, вы все равно можете получить довольно драматический эффект.

Протеиновые порошки

Когда дело доходит до протеиновых порошков, вы можете манипулировать ими гораздо больше в соответствии с вашим графиком. Чаще всего рекомендуется использовать порошки сразу после тренировки или первым делом утром. Вы действительно можете принимать протеиновый коктейль в любое время, будь то утром или между приемами пищи, после тренировки или перед сном.Считайте это просто еще одной «удобной» закуской.

В зависимости от вашего распорядка дня, будет зависеть, когда вы употребляете коктейль. Например, если вам нужно проснуться и уйти на работу очень рано, вы можете встряхнуть, чтобы начать свой день. Или, если вы не можете есть после тренировки, потому что до дома все еще довольно далеко, вы можете выпить коктейль после тренировки, а затем съесть приличную еду, когда вернетесь домой.

Когда дело доходит до того, сколько или сколько ложек порошка использовать, старайтесь получать около 20-40 граммов протеина на коктейль.Это означает, что на этикетке должно быть указано, сколько граммов протеина содержится в порошке на 100 граммов. Например. 75 граммов белка на 100 граммов. Затем вы можете определить, сколько граммов порошка использовать. В этом случае вы можете использовать 40 граммов порошка, чтобы получить 30 граммов белка. Если у вас есть весы, вы можете взвесить их, чтобы быть точным, или вы можете использовать мерную ложку, указанную на этикетке. Он должен сказать вам, сколько граммов в мерной ложке (хотя это не всегда точно, поскольку некоторые компании, производящие пищевые добавки, завышают количество).

Что касается разбавления, то это действительно так. Этикетка с добавкой даст вам рекомендации, например, смешайте 2 мерные ложки с 350 мл воды. Если вы попробуете это и обнаружите, что вам не нравится вкус, не стесняйтесь добавлять больше или меньше. Вы также можете использовать молоко или что-нибудь еще, кроме воды, чтобы смешать его с любым вкусом.

Подготовка образцов белка для sds-страницы

Руководство к исследованию

Лаборатория, часть 1
Лаборатория, часть 2
Лаборатория, часть 3
Избранные методы

Полипептид - это макромолекула, состоящая из неразветвленная последовательность аминокислот, каждая из которых связана к следующему одной пептидной связью.Протеин состоит из одного или нескольких полипептидов и / или дополнительных типы молекул, удерживаемые вместе любым из ряда молекулярных взаимодействий, часто включая ковалентные облигации. Такие взаимодействия приводят к нескольким уровням организации, которую мы называем первичной, вторичной, третичные и четвертичные структуры. Интактные белки общеизвестно, что их трудно воспроизводимо разделить. Рисунок полос меняется в зависимости от температуры, буфер, вариации pH, качество препарата, и т.п.Охарактеризовать вид препарата и получить предсказуемые результаты стараемся принимать белки так что то, что у нас осталось, является первичной структурой Только. Подготовка образцов иногда не выполняется того идеала, который вы обнаружите, анализируя ваши результаты.

Аминокислотная последовательность полипептида называется его первичная структура . Взаимодействие растворимых белков с водой приводит к водородной связи, которая частично отвечает для вторичного структура белков.Вторичная структура относится к локальной структуре полипептида цепь, включая спирали, гофрированные листы и витки. Функциональный белок имеет трехмерное структура, образованная водородными связями, гидрофобная аминокислоты, силы Ван-дер-Ваала и дисульфид склеивание. Трехмерная структура белка называется его высшим Структура .

Четвертичная структура относится к взаимодействию отдельных полипептидные цепи с другими молекулами для образования функциональных белки.Хотя некоторые белки действительно состоят из отдельных полипептидов, многие состоят из двух или более полипептидов, связанных ковалентно связи и / или нековалентные силы. На самом деле многие родные (функциональные) белки включают небелковые компоненты, такие как гемовая группа гемоглобина и углеводных групп на многих мембранно-связанных белки.

Денатурация образца

Для SDS-PAGE использовались различные буферы образцов, но все используйте те же принципы для денатурирования образцов. Получаем хорошо денатурация путем подготовки образца до конечной концентрации 2 мг / мл белка с 1% SDS, 10% глицерина, 10 мМ Tris-Cl, pH 6.8,1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), восстанавливающая агент, такой как дитиотреитол (DTT) или 2-меркаптоэтанол, и щепотка бромфенолового синего для отслеживания краситель (~ 0,05 мг / мл).

Готовим 2x концентрат пробы буфер, состоящий из 2% SDS, 20% глицерина, 20 мМ Tris-Cl, pH 6,8, 2 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), 160 мМ дитиотреитол (ДТТ) и 0,1 мг / мл красителя бромфенолового синего. Я предпочитаю DTT 2-меркаптоэтанолу, потому что последний имеет гораздо более сильный неприятный запах и не денатурирует нашу кровь фракции очень хорошо.Отчасти проблема в том, что наша вода ванны не достигают точки кипения, может потребоваться кипячение с 2-меркаптоэтанолом. Мы готовим все неизвестное к такая же концентрация, затем смешайте 1 объем подготовленной пробы с 1 объемом 2x буфер.

Итак, что делают различные компоненты? ЭДТА - консервант хелатирует двухвалентные катионы, что снижает активность протеолитических ферментов, которым требуются ионы кальция и магния как кофакторы. Трис действует как буфер, что очень важно. так как процесс укладки при прерывистом электрофорезе требует определенного pH.Глицерин делает образец более плотным чем буфер сэмплов, поэтому сэмпл останется внизу колодца, а не всплыть. Краситель позволяет исследователю отслеживать ход электрофореза.

SDS, DTT и тепло несут ответственность за фактическую денатурацию образца. SDS разделяет двух- и трехмерное структура белков за счет добавления отрицательного заряда к аминокислоты. Поскольку одинаковые заряды отталкиваются, белки более или менее выпрямились, немедленно сделав их бесполезными.Некоторая четвертичная структура может остаться из-за дисульфидной связи (ковалентный) и из-за ковалентных и нековалентных связей с другие типы молекул. Кстати, другое название SDS - лаурилсульфат. Ваш шампунь может содержать лаурилсульфат - сейчас разве это не вселяет уверенность в продукте?

Многие белки обладают значительными гидрофобными свойствами и могут быть тесно связаны с другими молекулами, такими как липиды, через гидрофобное взаимодействие. Нагрев образцов до минимум 60 градусов C встряхивает молекулы, позволяя SDS связываются в гидрофобных областях и завершают денатурацию.

Аминокислота цистеин содержит сульфгидрильную (-SH) группу. который самопроизвольно образует дисульфидную связь (-S-S-) с другим сульфгидрильная группа при нормальных внутриклеточных условиях. Дисульфид связывание ковалентно и не нарушается SDS. DTT - сильный Восстановитель. Его специфическая роль в денатурации образца заключается в удалить последнюю часть третичной и четвертичной структуры за счет уменьшения дисульфидных связей.

Большинство буферов для образцов не удаляют ковалентно связанные углеводы. или фосфатные группы, и некоторые ассоциации с другими типами макромолекулы трудно разрушить.Полипептиды содержат различное количество основных и кислых аминокислот, которые добавляют заряд молекулам, а отдельные аминокислоты различаются по молекулярному веса, хотя они могут связывать SDS с таким же сродством. Следовательно, отношение заряда к массе и относительная подвижность многих белков зависит от факторов, отличных от молекулярной массы. SDS-PAGE очень эффективен в обеспечении воспроизводимых результатов, но не рассчитывайте на точные значения для определения MW.

Суммы для загрузки

Полиакриламид имеет ограниченную способность к белку.Перегрузка приводит к осаждению и агрегации белков, образуя полосы и мазки. Результат недогрузки полностью разочарование, так как можно обнаружить только самые многочисленные из полипептиды, если что. Цели пробоподготовки помещать белки в денатурирующий буфер, делая их можно использовать для электрофореза, а также для регулировки концентраций образца, чтобы можно было загрузить необходимое количество белка на гель.

Получаем наилучшие результаты, если мы загрузим 10 мкл конечной концентрации 2 мг / мл денатурированного белка на лунку для образца.Хотя некоторые из более концентрированных белков будут перегружены, мы обнаружим полосы, которые представляют менее распространенные. А типичная лунка мини-геля вмещает 10 мкл легко, и, возможно, 20 мкл или больше, если лунки делятся в хорошей форме.

Разбавим все образцы до заданной концентрации и объем перед смешиванием с денатурирующим буфером. Эффективный сотрудники лаборатории разделяют обязанности, так что пока гели полимеризуются, сами образцы готовят, до объемов, которые как минимум вдвое превышают минимум, необходимый для заполнения лунки для образцов.Такие люди начинают свою работу подготовленными с расчеты объемов пробы, воды и 2х концентрированных буфер для образцов, необходимый им для подготовки каждого из образцов для электрофореза.

Чтобы полностью денатурировать образцы, мы нагреваем их паром. водяная баня не менее 10 минут. Стандарты для молекулярных определение веса готовятся аналогично. Они дорогие, и хотя поставщики дают инструкции по смешиванию, обычно необходимо протестировать их и внести коррективы перед полагаясь на них для внутренней калибровки важного геля.«Грязный» образец (содержащий много твердых частиц) должен центрифугироваться непосредственно перед загрузкой. Однако образцы, содержащие растворимые белки только образцы, полученные при обычном фракционировании крови, настолько "чистые", что центрифугирование не требуется.

Указания по пробоподготовке

  • В разделе материалов и методов сообщает следователь. общая процедура, используемая для подготовки проб. это дилетантский отчет о расчетах объема для каждого и каждый образец.Такая информация не имеет отношения к другим следователи. Ваши рецензенты и / или редактор будут настаивать об удалении такой ненужной информации.
  • Правильное количество белка для загрузки зависит от распределения отдельных белков в образце. Если образец состоит одного почти чистого полипептида 10 микрограммов будут дать огромную кляксу. Практическое правило для гелей для мини-плит: загрузите около 0,5 мкг белка на ожидаемую полосу. С сложные смеси содержат белки в самых разных концентрациях, не существует идеальной единой суммы для загрузки.
  • Нагревание просто ускоряет процесс денатурации за счет увеличение молекулярного движения. Некоторым это не нужно образцы, но необходимо для образцов мембран.
  • Нагревание до точки кипения может вызвать агрегацию белков, побеждая цель SDS-PAGE. Недостаточный нагрев может оставить некоторые белки не полностью денатурированными. Это может потребоваться метод проб и ошибок для достижения наилучших результатов.
  • После денатурирования образцы можно хранить на столе в комнате. temp, пока не пришло время их загрузить.Если они должны быть спасены еще на сутки их следует заморозить.
  • Если образцы нагревают без предварительного смешивания с образцом буфер, они действительно будут денатурированы, но не в предполагаемом манера. Подумайте, что происходит, когда вы варите яйцо.

Брэдфордский анализ белка

Брэдфордский анализ белка

Брэдфордский анализ белка
Эрик Марц для микробиологии 542, лаборатория иммунологии

Анализ Брэдфорда на белок широко используется из-за его чувствительность, скорость, удобство, отсутствие необходимости в УФ-совместимом спектрофотометр и адаптируемость к 96-луночным планшетам.В «Реагент Брэдфорда» - кислотное пятно, которое становится синим, когда взаимодействует с белком. Результирующая абсорбция лучше всего определяется при 595 нм. Реагент обычно продается как концентрированный запас с 5-кратной рабочей силой. Протеин стандартные или неизвестные должны быть достаточно разбавлены, чтобы не мешать с низким pH, достигаемым кислотой в реагенте.

Микропланшетный анализ Брэдфорда

Реагент и белок смешивают в лунках с плоским дном, 96-луночный планшет, оптическая плотность считывается при 595 нм (или ближайшая доступная длина волны, доступная на 96-луночном считывателе планшетов, который может составлять 570 нм или 620 нм).Как и во всех анализах, количество количества белка, помещенного в лунки, должно быть в пределах диапазона, в котором результат анализа прямо пропорционален концентрации белка, «линейный диапазон» анализа. На практике Брэдфорд результат часто не совсем линейный, и поэтому скорее кривая, чем прямая линия будет лучше соответствовать результатам.

По заявлению производителя эта проба в десять раз больше чувствительнее, чем поглощение при 280 нм. Если мы возьмем поглощение 0,1, чтобы быть минимально надежно обнаруживаемым, A 280 может обнаруживают минимум около 75 мкг / мл.Микропланшет Анализ Брэдфорда достигает абсорбции 0,1 при примерно 6 мкг / мл. Кроме того, микропланшет Bradford имеет то преимущество, что большой количество образцов можно быстро прочитать без дорогостоящего УФ-излучения кюветы.

В полностью заполненном состоянии одна лунка 96-луночного планшета вмещает 300 микролитры; 200 микролитров - удобный объем для использования на хорошо. Реагент Брэдфорда (краситель в фосфорной кислоте и смесь вода / метанол) предназначена для 5-кратного разбавления белок. Таким образом, в каждую лунку мы поместим 160 мкл белок, разведенный в воде; к этому мы добавим 40 микролитров Реагент Брэдфорда, тем самым достигая рекомендованного 5-кратного разбавления. реагента.

Стандартная кривая

Анализ Брэдфорда откалиброван с использованием чистого белка известная концентрация, называемая «стандартным белком». Как и другие белков, результат анализа Брэдфорда отличается для разные белки. Вы знаете, что A 280 - это примерно в два раза чувствительнее к IgG, чем к БСА. В Брэдфорде все наоборот: примерно в два раза чувствительнее к БСА, чем к IgG. Лучше всего использовать тот же белок для стандарта, который вы хотите оценить в неизвестный.Однако допустимо использовать другой белок для стандарт при условии, что вы знаете поправочный коэффициент для неизвестный белок. По традиции белки разводят в дистиллированной воде. для анализа Брэдфорда.

  1. Залейте 160 мкл воды в колодец А-1, который будет взят быть холостым, и вычитается из оптической плотности всех остальных лунок.
  2. Используйте стандартный белок в концентрации 0,05 мг / мл (50 мкг / мл; разбавьте предоставленный стандарт до 0,05 мг / мл, если он больше концентрированный).Выполните трехкратные разведения следующим образом:
           микролитров / лунку
          ------------------
                  Standard @ Assay
    Рядовая вода 0,05 мг / мл мг / мл **
    
    В 144 16 *
    С 120 40
    Д 80 80
    E 0 160
    
    * Используйте пипетку P20; P200 подходит для 30 и более микролитров.
    ** Рассчитайте это для объема 160 микролитров, а не для последних 200
    объем микролитра. Это упрощает интерпретацию ваших неизвестных.
     
  3. Добавьте 40 мкл реактива Брэдфорда в каждую лунку и сделайте пипетку восемь раз, чтобы хорошо перемешать.При дозировании избегайте создание пузырей, удерживая кончик пипетки глубоко под поверхностью. Если вы начнете с пустого места и перейдете к тому же или выше концентрации, вы можете использовать один и тот же желтый наконечник для всех колодцы. (Если вы хотите выдуть остаточную смесь из наконечника, сделайте это на ткани, а не в реактив Брэдфорда.)
  4. Проверить лунки на пузырьки. Если присутствуют пузырьки, используйте P20, чтобы добавить 5 микролитров этанола на поверхность лунки - это разбивает пузыри не влияя на абсорбцию.
  5. Считайте оптическую плотность ваших лунок при доступной длине волны на считывателе ближе всего к 595 нм. (Производитель реактива рекомендует прочитать анализ через 5-60 минут после смешивания.) Запишите время, когда вы читаете табличка на распечатке (если считыватель не печатает время).
  6. Находятся ли оптические плотности в приемлемом диапазоне? Учитывая поглощение бланка (около 0,38; некоторые читатели сообщают об этом и некоторые нет), каков надежный диапазон для исправленных абсорбция?
  7. Если абсорбция выходит за пределы допустимого диапазона, увеличьте или уменьшить концентрацию исходного стандарта белка чтобы поместить значения в желаемый диапазон, и снова запустите стандартную кривую.Если снова запустите, перенесите вставьте старую заготовку в другую лунку в строке A и установите новую в скважина A1, поэтому она соответствует новой стандартной кривой.
  8. Необязательно: После получения приемлемых результатов диапазона, вы можете сделать более подробную стандартную кривую, например как этот в двух экземплярах:
    Стандарт воды в ряду мг / мл
    
    А 160 0
    В 144 16
    С 130 30
    Д 115 45
    E 90 70
    F 60 100
    G 30 130
    В 0 160
     
  9. Постройте график результатов (оптическая плотность по вертикальной оси / ординате / Y против.белок мг / мл по горизонтальной оси / абсцисса / X).
  10. Необязательно: Перечитайте табличку. Есть абсорбция существенно изменилось? Сколько времени прошло между чтениями?
  11. Закончив с тарелкой, опустите ее в раковину и промыть лунки несколько раз дистиллированной водой (для удаления белок), а затем этанол до полного удаления синего пятна. Снова промыть дистиллированной водой и позвольте его нужно высохнуть без крышки для последующего повторного использования.

Определение неизвестных (фракции из колонки сефадекс)

Поглощение в анализе Брэдфорда варьируется от цикла к запуску в зависимости от на партии используемого реагента, время между смешиванием и считыванием, и какой ридер используется.Поэтому лучше всего использовать стандартный кривой вместе с неизвестными, смешивая реагент со стандартным колодцы в то же время, что и в ваших неизвестных колодцах.

Общее количество белка, помещенного в наши колонки с Сефадексом, составляет примерно 100 миллиграммов. Это будет распространено примерно на 40 1 мл фракции. Какая чувствительность нам нужна? Если у фракции менее 0,5 мг / мл, нам не нужно знать концентрацию точно, так как это не будет достаточно способствовать пику, чтобы быть включены в бассейн.Анализ может обнаружить 0,005 мг / мл, поэтому мы разбавить каждую фракцию в 100 раз, доведя 0,5 мг / мл в неразбавленном фракция - минимум, который мы можем надежно обнаружить. Это требует, чтобы мы потребляем лишь крошечную часть каждой фракции.

  1. Создайте стандартную кривую разведения белка в своем планшете.
  2. Запланируйте план планшета с двумя лунками на неизвестную фракцию. Первая лунка каждой пары будет использоваться только для разведения 1/10; реагент Брэдфорда добавляться не будет. Второй колодец будет содержать разведение 1/100, к которому будет добавлен реагент Брэдфорда.В каждую из пар лунок для неизвестных налейте 144 мкл воды.
  3. С P20 добавьте 16 микролитров неизвестного вещества в первую лунку каждой пары, и касаясь пипеткой нижнего угла, введите и вытащите пипетку десять раз смешивать. Перенесите 16 мкл разведения 1/10 во вторую лунку. пары и смешайте. Поскольку цель тестирования дробей - решить какие фракции объединить, на этом этапе требуется лишь приблизительная точность. Следовательно, вы можете использовать тот же наконечник для многих неизвестных разведений .
  4. Добавьте 40 мкл реактива Брэдфорда во вторую лунку. каждой пары (разведение 1/100) и пипеткой вводить и выводить 8-10 раз хорошо перемешать. При дозировании избегайте образования пузырей держать наконечник пипетки глубоко под поверхностью, касаясь дна угол.
  5. Проверить лунки на пузырьки. Если присутствуют пузырьки, используйте P20, чтобы добавить 5 микролитров этанола на поверхность лунки - это разбивает пузыри не влияя на абсорбцию.
  6. Считайте оптическую плотность ваших лунок при доступной длине волны на считывателе ближе всего к 595 нм.(Производитель реактива рекомендует прочитать анализ через 5-60 минут после смешивания.) Запишите время, когда вы читаете табличка на распечатке.
  7. Постройте стандартную кривую (поглощение по оси Y ось против белка мг / мл на оси X).
  8. Оцените концентрацию неизвестных по вашему график. Постройте график (мг / мл по оси ординат в зависимости от номера фракции на по оси абсцисс). Поскольку требуется удвоенная концентрация IgG как BSA, чтобы получить равную оптическую плотность в анализе Брэдфорда, если вы использовали стандартную кривую BSA, исправили оценочные неизвестные концентрации: умножьте "BSA" мг / мл на два, чтобы оценка IgG мг / мл .
  9. Решите, какие фракции объединить. Проконсультируйтесь с инструктором, чтобы проверить ваш план. Объедините фракции, записав общий объем.
  10. В доступные лунки 96-луночного планшета внесите подходящее разведение каждого пула в трех экземплярах. Создайте новый стандарт кривая серия. Считайте данные на планшете и определите концентрацию IgG. в ваших бассейнах. Умножьте концентрацию на общий объем на получить общий мг IgG в каждом пуле.
  11. Закончив с тарелкой, опустите ее в раковину и промыть лунки несколько раз дистиллированной водой (для удаления белок), а затем этанол до полного удаления синего пятна.Снова промыть дистиллированной водой и позвольте его нужно высохнуть без крышки для последующего повторного использования.

Анализ данных анализа белков | Thermo Fisher Scientific

В большинстве анализов на белок концентрации белка в образце определяются путем сравнения их результатов анализа с ответами на серию разведений стандартов, концентрации которых известны. Образцы белка и стандарты обрабатываются таким же образом, смешивая их с реагентом для анализа и используя спектрофотометр для измерения оптической плотности.Отклики стандартов используются для построения или расчета стандартной кривой. Затем значения абсорбции неизвестных образцов интерполируются на график или формулу для стандартной кривой для определения их концентраций. Этот сравнительный метод определения концентрации «неизвестного» концептуально прост и понятен. Однако его реализация в протоколе анализа осложняется пипетированием и этапами разведения, оценкой повторов, корректировкой холостого опыта и другими факторами. Эти шаги часто вызывают путаницу в расчетах, необходимых для получения окончательного определения.

Подготовка стандартов для построения стандартной кривой

В следующих таблицах представлена ​​информация для подготовки набора стандартов белка для стандартной кривой для стандартного анализа BCA и анализа Брэдфорда. Для продолжения разведите содержимое 1 мл стандарта BSA (2 мг / мл) в несколько чистых флаконов, предпочтительно используя тот же разбавитель, что и исследуемые образцы.

Стандартная кривая анализа белка BCA

Таблица 1. Микропланшет или пробирка.

9172 925 917 µг / г

25 D

917 флакона из флакона 325 мкл 917 флакона
Флакон Объем разбавителя Объем и источник BSA Конечная концентрация BSA
A 0 300 мкл запаса 2,000 125 мкл 375 мкл исходного раствора 1500 мкг / мл
C 325 мкл 325 мкл исходного материала 1000 мкг / мл
D 917 флакон с разведением В 750 мкг / мл
E 325 мкл 325 мкл флакона с разведением С 500 мкг / мл
F 325 мкл 250 мкг / мл
G 325 мкл 325 мкл флакона F разведение 125 мкг / мл
H 400 мкл 10017 25 мкл 917 флакон 26 G 25 мкг / мл
I 400 мкл 0 0 мкл / мл = бланк

Таблица 2.Улучшенная пробирка для анализа белка BCA.

Флакон Объем разбавителя Объем и источник BSA Конечная концентрация BSA
A 700 мкл 100 мкл запаса 250 250 B 400 мкл 400 мкл флакона для разведения 125 мкг / мл
C 450 мкл 300 мкл флакона B для разведения 50 мкг / мл 400 D 400 мкл разведения C во флаконе 25 мкг / мл
E 400 мкл 100 мкл раствора D во флаконе 5 мкг / мл
F 400 0 мкл / мл = бланк

Стандартная кривая анализа протеина Брэдфорда

Таблица 3.Микропланшет или пробирка.

9172 925 917 µг / г

25 D

917 флакона из флакона 325 мкл 917 флакона
Флакон Объем разбавителя Объем и источник BSA Конечная концентрация BSA
A 0 300 мкл запаса 2,000 125 мкл 375 мкл исходного раствора 1500 мкг / мл
C 325 мкл 325 мкл исходного материала 1000 мкг / мл
D 917 флакон с разведением В 750 мкг / мл
E 325 мкл 325 мкл флакона с разведением С 500 мкг / мл
F 325 мкл 250 мкг / мл
G 325 мкл 325 мкл флакона F разведение 125 мкг / мл
H 400 мкл 10017 25 мкл 917 флакон 26 G 25 мкг / мл
I 400 мкл 0 0 мкл / мл = бланк

Таблица 4.Микропланшет или пробирка для разбавленных образцов.

мкл разведения во флаконе B 9
Флакон Объем разбавителя Объем и источник BSA Конечная концентрация BSA
A 237 мкл 3 мкл исходного раствора B 495 мкл 5 мкл исходного раствора 20 мкг / мл
C 397 мкл 3 мкл исходного раствора 15 мкг / мл
250 D
10 мкг / мл
E 200 мкл 200 мкл флакона с разбавлением D 5 мкг / мл
F 150 мкл 150 мкл E 2.5 мкл / мл
G 500 мкл 0 0 мкл / мл = бланк

Модифицированная стандартная кривая анализа белка Лоури

Таблица 5. Микропланшет или пробирка.

Флакон Объем разбавителя Объем и источник BSA Конечная концентрация BSA
A 250 мкл 750 мкл запаса мл B 500 мкл 500 мкл флакона Разведение A 1000 мкг / мл
C 0.5 мл 500 мкл флакона для разведения 750 мкг / мл
D 500 мкл 500 мкл флакона для разведения B 500 мкг / мл
E 917 500 мкл флакона с разведением D 250 мкг / мл
F 500 мкл 500 мкл флакона с разбавлением E 125 мкг / мл
G 800 мкл 200 мкл Разведение F 25 мкг / мл
H 1000 мкл 0 0 мкл / мл = бланк

Изучите стандарты белка


Принципы стандартной кривой

1.Образцы, прошедшие идентичный анализ, можно сравнивать напрямую.

Ответы на результаты анализа образцов напрямую сопоставимы друг с другом, если они обрабатываются точно так же. Различия в количестве белка - единственная возможная причина различий в конечном поглощении (интенсивности окраски), если выполняются все четыре из следующих условий:

  • Образцы растворены в одном буфере
  • Та же партия и запас реагента для анализа используется для всех образцов
  • Все образцы смешиваются и инкубируются в одно и то же время и при одинаковой температуре
  • Ошибок при пипетировании не возникает

Конечно, из-за различий в химии методов анализа белков разные белки будут генерировать разные значения абсорбции даже в той же концентрации.Это называется «вариацией белок-белок» или «однородностью белка» и более подробно обсуждается в других статьях, посвященных методам определения белков.

Рис. 1. Примеры стандартных кривых для набора Thermo Scientific Pierce Protein Assay Kit. Были проанализированы восемь концентраций бычьего сывороточного альбумина (BSA) и бычьего гамма-глобулина (BGG). Были нанесены значения отклика (абсорбции), и через точки проведена линия, которая лучше всего подходит. Если неизвестные образцы тестировались одновременно, их концентрации можно было бы определить по одной из этих стандартных кривых.

2. Единицы в равных единицах

Единица измерения, используемая для выражения стандартов, по определению является той же единицей измерения, которая связана с вычисленным значением для неизвестного образца (т. Е. Окончательные результаты для неизвестных образцов будут выражены в той же единице измерения, которая использовалась для стандарты). Например, если стандарты выражены в микрограммах на миллилитр (мкг / мл), то значение для неизвестного образца, которое определяется путем сравнения со стандартной кривой, также выражается в микрограммах на миллилитр.


Распространенные заблуждения

1. Образцы, прошедшие идентичный анализ, можно сравнивать напрямую.

Вопреки тому, что думают многие люди, нет необходимости и даже не полезно знать фактическое количество (например, микрограммы) белка, нанесенного на каждую лунку или кювету анализа. Рассмотрим простой пример, в котором набор для анализа белка Coomassie Plus (номер детали 23236) используется для анализа двух образцов белка: тестируемого образца, концентрация которого неизвестна, и стандарта, концентрация которого составляет 1 мг / мл (= 1000 мкг / мл). мл).(Обычно для построения кривой отклика требуется полный набор стандартов, но это упрощенный пример.)

В протоколе микропланшета (см. Рисунок) добавляется 10 мкл образца (тестового или стандартного) и 300 мкл реагент для анализа на лунку. Поскольку в лунку добавляется 10 мкл стандартного образца, в лунке содержится 0,010 мл x 1000 мкг / мл = 10 мкг белка. Если анализ приводит к тому, что испытуемый образец имеет такое же конечное поглощение, что и стандартный образец, то вывод заключается в том, что испытуемый образец содержит такое же количество белка, что и стандартный образец.Поскольку на лунку приходилось 10 мкг стандарта, можно было указать определенную концентрацию исследуемого образца как 10 мкг / лунку. Однако количество белка на лунку почти наверняка не представляет интереса; вместо этого обычно хотят знать концентрацию белка в исходном тестовом образце. Поскольку исходный стандарт был 1000 мкг / мл, испытуемый образец, который показал такое же поглощение в анализе, также должен быть 1000 мкг / мл.

Рисунок 2. Схема этапов анализа белка. Если стандартные ( верхний ряд, ) и неизвестные ( нижний ряд, ) образцы распределяются и смешиваются с одинаковым количеством реагента для анализа, то они напрямую сравниваются. Если абсорбция конечных растворов ( зеленый ) идентична, то концентрация неизвестного образца определяется как 1 мг / мл. Количество белка в лунке для анализа ( в середине, ) и концентрация в реагенте для анализа ( справа, ) не имеют значения.

2.Заблуждение: мне нужно знать концентрацию белка в реактиве для анализа.

Кроме того, нет необходимости и нет необходимости знать концентрацию белка, которая существует при разбавлении в реактиве для анализа. В приведенном выше примере, поскольку стандарт 10 мкг был разбавлен до 310 мкл после добавления 300 мкл реагента для анализа, конечная концентрация в лунке составляет 10 мкг / 310 мкл = 0,0323 мкг / мкл = 32,3 мкг / мл. Следовательно, можно указать определенную концентрацию исследуемого образца как 32,3 мкг / мл. Однако концентрация белка при разбавлении реагентом для анализа почти наверняка не представляет интереса; вместо этого нужно знать концентрацию белка в исходном тестовом образце.Поскольку исходный стандарт составлял 1000 мкг / мл, испытуемый образец, который давал такую ​​же оптическую плотность при анализе, также должен составлять 1000 мкг / мл.


Применение коэффициентов разбавления

Одна ситуация, в которой важно учитывать фактор разбавления, - это когда исходный образец был предварительно разбавлен относительно стандартного образца. Продолжая тот же пример, предположим, что исходный образец белка, как известно, составляет приблизительно 5 мг / мл. Он слишком концентрирован для анализа с помощью набора для анализа белка Coomassie Plus, диапазон анализа которого в стандартном протоколе микропланшета составляет 100-1500 мкг / мл.Однако можно разбавить его в 5 раз в буфере (т.е. 1 часть образца плюс 4 части буфера), а затем использовать этот разбавленный образец в качестве тестового образца в анализе белка. Если исследуемый образец имеет такое же поглощение, как и стандартный образец 1000 мкг / мл, то можно сделать вывод, что исследуемый (5-кратно разведенный) образец составляет 1000 мкг / мл, и, следовательно, исходный (неразбавленный) образец имеет размер 5 x 1000 мкг. / мл = 5000 мкг / мл = 5 мг / мл.


Подгонка кривой и интерполяция

В отличие от примера, описанного выше, в большинстве анализов используется полный набор стандартов белка, концентрации которых охватывают эффективный диапазон анализа (например,г., 100-1500 мкг / мл). В редких случаях, если вообще когда-либо, тестовый образец дает результат анализа, который точно соответствует одному из конкретных стандартных образцов. Следовательно, необходим метод для расчета или интерполяции между стандартными точками выборки.

Рисунок 3. Как использовать стандартную кривую. Значения абсорбции для различных известных концентраций стандарта белка нанесены на график (ромбы).

Если исследуемый образец дает оптическую плотность 0,6, как использовать стандартную кривую для расчета концентрации белка?

Большинство планшет-ридеров и спектрофотометров имеют соответствующее программное обеспечение, которое автоматически строит наиболее подходящую (линейную или криволинейную) линию регрессии через стандартные точки, интерполирует тестовые образцы на этой линии регрессии и сообщает рассчитанное значение.Важно выбрать подходящий алгоритм аппроксимации кривой, поскольку математическая формула, описывающая подобранную кривую, будет использоваться для расчета концентрации исследуемого образца.

На следующих рисунках показано, как различные алгоритмы подбора кривой влияют на точность расчетов анализа белка. Немногие, если таковые вообще имеются, анализы белка являются абсолютно линейными во всем диапазоне применимых анализов. Пока используется соответствующая аппроксимация кривой, анализ не обязательно должен быть линейным, чтобы быть точным.Если подгонку кривой необходимо выполнять вручную, то подгонка по точкам обычно будет более точной, чем линейная подгонка для всего диапазона стандартных точек (см. Рисунок). Подгонка «точка-точка» - это линейная подгонка между каждой последовательной парой точек.

Рис. 4. Сравнение стандартных кривых для двухточечной и линейной аппроксимации. Интерполяция и расчет для исследуемого образца, имеющего оптическую плотность 0,6, приводят к значительно разным значениям концентрации белка. В этом случае метод «точка-точка» явно обеспечивает более точную контрольную линию для расчета тестового образца.

Рис. 5. Сравнение двухточечных и наиболее подходящих стандартных кривых. Интерполяция и расчет для неизвестного образца с оптической плотностью 0,6 приводят к несколько другим значениям концентрации белка. В этом случае наиболее подходящая кривая обеспечивает более точный расчет, чем двухточечная кривая.

Загрузить технический совет: как использовать стандартную кривую анализа белка


Другие факторы, влияющие на точность и прецизионность анализа

Реплицирует

На точность и точность анализа белка влияет несколько факторов.Единственный способ оценить степень случайной ошибки - это включить дубликаты каждого стандарта и тестового образца. Поскольку все тестовые образцы оцениваются путем сравнения со стандартной кривой, особенно важно запускать стандарты в трех экземплярах. Затем можно рассчитать стандартное отклонение (SD) и коэффициент вариации (CV), что дает степень уверенности в точности дозирования техническим специалистом. Если используются повторения, аппроксимация кривой выполняется по среднему значению (за вычетом очевидных выбросов).

Пустая коррекция

Опубликованные графики стандартных кривых (как на рисунках на этой странице) обычно показывают линию, проходящую через начало координат (0,0). Несмотря на внешнюю привлекательность, это не имеет отношения к расчетам. Большинство рабочих реагентов для анализа белка обладают абсорбционной способностью на длине волны детектирования (т. Е. Они имеют положительную абсорбцию даже при отсутствии протеина, см. Рисунки ниже).

Обычной практикой является вычитание оптической плотности нулевого стандарта (ов) из всех остальных значений оптической плотности образца.Однако, если для расчета статистики ошибок будут использоваться повторяющиеся стандарты нулевого анализа, то для коррекции холостого опыта может потребоваться другое независимое значение. Если стандарты были приготовлены в буфере, соответствующем тестовым образцам, и этот буфер содержит компоненты, которые могут повлиять на химию анализа, информативно проверить абсорбцию с помощью «водного эталона» (т. Е. С нулевым содержанием белка, проба воды). Тогда различия между эталонной водой и нулевым эталонным образцом указывают на буферный эффект.

Рисунок 6. Стандартные кривые. Типичные стандартные кривые для бычьего сывороточного альбумина (BSA) и бычьего гамма-глобулина (BGG) в анализе белка BCA. Обратите внимание, что значение нулевого бланка белка было вычтено из всех стандартов (и также будет вычтено из любых неизвестных), чтобы исключить поглощение, вносимое буфером для образца, таким образом, нулевой стандарт находится в начале графика.

Наклон стандартной кривой и длина волны измерения

Наклон стандартной кривой напрямую зависит от точности и чувствительности анализа.При прочих равных, самый крутой участок кривой является наиболее надежным. Для большинства анализов на белок стандартная кривая имеет самый крутой наклон (т. Е. Имеет наибольший положительный наклон) в нижней половине диапазона анализа. Фактически, верхний предел диапазона анализа определяется точкой, в которой наклон приближается к нулю; линия там настолько плоская, что даже небольшая разница в измеренных значениях оптической плотности приводит к большой разнице в расчетных концентрациях.

Однако самая нижняя часть диапазона анализа, хотя и имеет самый крутой наклон, не всегда оптимальна, поскольку случайные ошибки и мешающие вещества имеют большее относительное влияние в образцах, содержащих очень небольшие количества белка.Поэтому наиболее четкие результаты обычно получаются с тестовыми образцами, которые предварительно разбавлены таким образом, чтобы они соответствовали нижней средней части диапазона анализа. Многие техники тестируют образцы при двух или трех разведениях, чтобы убедиться, что хотя бы один из них «попадает» в эту часть диапазона анализа.

Длины волн измерения, рекомендуемые для каждого метода анализа белка, являются оптимальными, поскольку они дают стандартные кривые с максимальным наклоном. Обычно, но не всегда, это соответствует максимуму поглощения.(В определенных обстоятельствах при выборе наилучшей длины волны измерения также важны другие соображения, такие как предотвращение помех от компонентов образца, которые поглощают на аналогичных длинах волн).

Фактически, для большинства анализов белка, в зависимости от требуемой точности, приемлемые результаты могут быть получены с использованием любых длин волн измерения в определенном диапазоне. Следующие рисунки иллюстрируют эту точку зрения (подробности см. В Техническом совете № 25).

Рисунок 7.Спектры поглощения белка BCA. Сканы восьми стандартов BSA (от 0 до 2000 мкг / мл), протестированных с помощью набора для анализа белков BCA от Thermo Scientific Pierce (номер по каталогу 23225). Толстая линия - образец 2000 мкг / мл. Оптимальная длина волны измерения для этого анализа составляет 562 нм.

Рис. 8. Спектры поглощения, полученные при анализе белка Кумасси (Брэдфорд). Сканирование восьми стандартов BSA (от 0 до 2000 мкг / мл), протестированных с помощью реагента для анализа протеина Thermo Scientific Pierce Coomassie Plus (арт.23236). Толстая линия - образец 2000 мкг / мл. Оптимальная длина волны измерения для этого анализа - 595 нм. Обратная стандартная кривая может быть построена путем измерения на длине волны 465 нм. Обратите внимание, что базовое поглощение этого реагента составляет ~ 0,4 при 595 нм (измерено в кювете 1 см).

Загрузить технический совет: определите допустимые длины волн для анализа белка

Мешающие вещества

Возможные эффекты мешающих веществ не обсуждались в этой статье, поскольку предполагалось, что все образцы белков обрабатывались одинаково, включая буферы, в которых эти белки были растворены.В этой ситуации любые помехи, вызванные компонентами буферов, одинаковы как для тестовых, так и для стандартных образцов. Тем не менее, вмешательство небелковых веществ в образцах, которые блокируют или вносят вклад в цветную реакцию анализа, является важной проблемой для любой системы анализа белка. Обратитесь к связанным статьям и документам для дальнейшего обсуждения этой темы.

Загрузить технический совет: таблица совместимости анализа белков


  1. Bradford, MM.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *